[发明专利]金莲花多糖的提取方法及其体外活性的检测方法

权利要求书

1.金莲花多糖的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：

按料液比1∶60的比例向金莲花花瓣或花茎的粉末中加入适量水，在80℃的条件下水浴加热3h，每隔30min用玻璃棒搅拌一次，反复浸提三次，抽滤得清液，合并上清液，即得。

2.金莲花多糖的体外活性检测方法，其特征在于：

A、多糖吸湿性检测：

将金莲花多糖样品盛放于铝盒中并于烘箱50℃烘干至恒重后，放于盛有饱和硫酸铵溶液和饱和碳酸钠溶液的干燥器中，即置于相对湿度为81％以及43％的干燥器中，并将整个干燥器放置于恒温培养箱中，恒温25℃，分别于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精确称取质量，通过下式计算多糖的吸湿率：吸湿率(％)＝(样品水分的增加量/样品原质量)×100％；

B、多糖保湿性检测

在洗净并干燥的干燥器底部加入干燥的变色硅胶，每份金莲花多糖样品加入20ml蒸馏水，并再次精确称取质量，放置于干燥器内，并将整个干燥器放置于25℃恒温培养箱中，分别于放置4h、8h、12h、20h、44h后用分析天平精确称取质量，通过下式计算多糖的保湿率：保湿率(％)＝(样品水分的减少量/样品原质量)×100％；

C、多糖的抗氧化检测

(1)总还原力的测定

取1ml不同质量浓度多糖溶液，加入2.5ml，pH6.6的磷酸缓冲液，之后加入3ml质量分数1％的铁氰化钾水溶液，充分混匀后于50℃水浴中保温10min；取出后迅速冷却，再加入2.5ml质量分数10％的三氯乙酸水溶液，振荡摇匀，于3000r/min，离心10min；移取上清液2.5ml于试管中，加2.5ml蒸馏水和0.5ml质量分数0.1％的三氯化铁水溶液，室温下避光反应20min，于700nm处测定吸光值；

(2)DPPH清除能力的测定

取1ml不同质量浓度的多糖溶液，加入3ml，0.2mmol/L的DPPH自由基乙醇溶液，混匀后加入4.0ml乙醇溶液，于室温下避光反应30min后，在517nm下测定吸光度，按以下公式计算样品对·DPPH的清除率：

式中：A_c为空白样品的吸光值，A_s为加入不同浓度样品后的吸光值。

(3)ABTS自由基清除能力的测定

将7mmol/L的ABTS溶液10ml与终浓度为2.45mmol/L的过硫酸钾溶液10ml混合，于室温、阴暗条件下放置14-16小时，使用前用0.2mol/L的pH＝7.4的磷酸缓冲液将其稀释至吸光度为0.72～1.2，即得到ABTS自由基工作液；

取不同质量浓度的多糖溶液各200μL，加入ABTS自由基工作液4ml，反应6min后在波长734nm处测吸光度，按以下公式计算样品对ABTS自由基的清除率。

式中：A_c为空白样品的吸光值，A_s为加入不同浓度样品后的吸光值。