[发明专利]一种抗原热稳定乳液及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗原热稳定乳液及其制备方法和应用，所述抗原热稳定乳液包括水相、油相和结合有抗原的无机颗粒，所述油相被水相包裹，所述结合有抗原的无机颗粒分散于水相与油相分界面上；所述抗原与无机颗粒的结合形式为静电吸附；本发明提供的乳液，可以显著提高生物体抗原的热稳定性；矿物相中的结构水分子通过紧密连结在矿化蛋白周围，降低蛋白分子与外界环境中水分子的氢键交换速率，减少热运动过程对蛋白结构的破坏，提高疫苗在高温环境下的稳定性，延长疫苗保存的有限期，25℃下可储存3周以上；此外，乳液还可作为疫苗佐剂、药物递送或缓控释载体应用，避免了表面活性剂的使用，能够降低对人体的毒害和环境污染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗原热稳定乳液及其制备方法和应用。

背景技术

长期以来，传染性疾病一直是人类健康的重大威胁之一。接种疫苗作为应对传染病的有效手段之一，在疾病的预防和控制中显示出极其重要的作用。然而，早期的疫苗多为减毒或灭活的全病毒疫苗，尽管其能激发较强的保护性抗体水平和细胞免疫应答，但也存在着毒力恢复和灭活不彻底的风险。因此随着生物技术的发展，具有更高安全性的裂解疫苗、亚单位疫苗、重组蛋白疫苗、合成肽疫苗、多糖结合疫苗等在临床中逐步取代了减毒及灭活疫苗。尤其是近年来，生化工程的发展帮助实现了抗原的大规模表达和纯化，进一步推动了上述疫苗的应用。这些新型疫苗纯度高、成分明确、安全性好，但同时存在着分子小、免疫原性弱，单独应用难以诱导机体产生有效的免疫应答，需要外加佐剂以增强其免疫效果。

添加佐剂的主要作用在于增强抗原的免疫原性。同时，部分佐剂还可以发挥调节抗体亲和力、特异性和亚型分布，刺激细胞免疫应答，降低抗原剂量，减少接种频率以及提高免疫功能不全者(如儿童和老年)的应答成功率等作用。

目前，商品化应用最为广泛的人用佐剂为铝盐佐剂，其通过抗原储库效应和诱发炎症等免疫刺激效应发挥增强免疫应答的作用。铝盐佐剂是最早被FDA批准应用于人的佐剂。然而，铝盐佐剂也存在着应用局限性：1)铝盐佐剂中携载的抗原是以可溶性抗原的形式被抗原提呈细胞(APCs)摄取，主要提升体液免疫应答，而无法诱导细胞免疫应答。然而，对于如病毒感染等胞内感染疾病，细胞免疫应答尤其是CD8+T细胞介导的细胞毒效应对于杀伤已被感染的细胞、控制及清除体内病毒至关重要。2)铝盐佐剂的抗原缓释时间较长，导致抗原提呈效果不理想、免疫应答产生时间滞后。3)注射部位偶有严重的局部反应，出现红斑、结节、肉芽肿性炎症等。同时，伴随疫苗的发展及应用范围的扩大(如采用非注射途径接种疫苗、治疗性疫苗等)，铝盐佐剂逐渐无法满足疫苗发展的需求，促使人们积极寻找新的疫苗佐剂。

除铝盐佐剂外，另一类在临床中应用较多的商品化佐剂为油乳佐剂，其能有效地提升抗体水平并延长抗体的维持时间。并且对于老人、儿童等免疫功能不全者，采用油乳佐剂也能有效地刺激机体产生较高的抗体水平。其免疫增强机制在于诱导人体的单核细胞，中性粒细胞及嗜酸性粒细胞等在注射部位快速聚集，增强细胞对抗原的摄取和提呈，同时促进树突状细胞(DCs)的成熟分化及向外周淋巴结的迁移。其中部分上市及临床的油乳佐剂如表1所示。

表1