[发明专利]一种免疫增强型多价疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种ESM-1的免疫增强型多价疫苗，其特征在于，由LAG-3干扰基因重组表达载体和融合多肽通过静电作用结合，所述LAG-3干扰基因重组表达载体由LAG-3RNAi片段和真核表达载体连接组成，所述LAG-3RNAi片段的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述融合多肽由ESM-1的Endo4表位肽、Endo6表位肽和Endo9表位肽组成，所述Endo4表位肽、Endo6表位肽和Endo9表位肽分别由Endo4-12多肽、Endo6-14多肽、Endo9-17多肽和穿膜肽、内质网滞留信号肽、接头肽连接组成。

2.根据权利要求1所述的多价疫苗，其特征在于，所述穿膜肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述内质网滞留信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述接头肽的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述Endo4表位肽具有如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的多价疫苗，其特征在于，所述Endo6表位肽具有如SEQ ID No.5所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的多价疫苗，其特征在于，所述Endo9表位肽具有如SEQ ID No.6所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的多价疫苗，其特征在于，所述真核表达载体为pCMV-neo。

6.权利要求1-5任意一项所述的多价疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)所述融合多肽的合成与纯化；

2)所述LAG-3干扰基因重组表达载体的构建：根据LAG-基因设计上、下游引物，所述真核表达载体被pCMV-neo经双酶切后与LAG-3RNAi片段连接即得所述LAG-3干扰基因重组表达载体；

3)所述ESM-1的免疫增强型多价疫苗的制备：在混旋状态下，向溶解有LAG-3干扰基因重组表达载体的0.9％的Nacl溶液中滴加溶解有所述融合多肽的水溶液，滴加完毕后继续混旋20分钟，再静置20分钟，即得所述多价疫苗。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中采用固相合成法进行合成，合成中每种氨基酸的用量与树脂的摩尔比为4:1，使用的切割液由结晶苯酚、1,2-乙二硫醇、苯甲硫醚、去离子水和三氟乙酸组成。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中滴加的所述融合多肽溶液中Endo4表位肽、Endo6表位肽和Endo9表位肽的摩尔比为1:1:1。

10.权利要求1-5任意一项所述的ESM-1的免疫增强型多价疫苗在用于制备抗胶质瘤药物中的应用。