[发明专利]一种用于检测多靶点基因突变、甲基化修饰和/或羟甲基化修饰的检测探针、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种检测探针，其特征在于，所述检测探针包括至少一个捕获探针，所述捕获探针从5’端到3’端的序列依次包括前序序列、探针随机标签序列和目标互补序列，所述前序序列如SEQ ID NO:1所示，所述探针随机标签序列由0-12个随机碱基组成，所述目标互补序列包括至少10个连续的与待检测基因互补的碱基。

2.一种多靶点基因突变、甲基化修饰和/或羟甲基化修饰的检测方法，其特征在于，包括使用如权利要求1所述的检测探针，所述检测探针与待检测基因杂交。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括使用第一接头，所述第一接头从5’端到3’端的序列依次包括第一序列、第一接头随机标签序列和T碱基，所述第一序列的3’端到5’端选自如SEQ ID NO:2所示的序列中3’端到5’端的至少10个连续的碱基，所述第一接头随机标签序列由0-12个随机碱基组成，所述第一接头与所述待检测基因的5’端连接。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括使用第二接头，所述第二接头从5’端到3’端的序列依次包括第二接头随机标签序列和第二序列，所述第二接头随机标签序列由0-12个随机碱基组成，所述第二序列选自如SEQ ID NO:3所示的序列中至少6个连续的碱基，所述第二接头用于促进所述第一接头与所述待检测基因的5’端连接。

5.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当进行多靶点基因突变检测时，所述检测方法包括：

(1)将所述待检测基因片段化形成基因片段，将所述基因片段进行末端修复以及在3’端加A碱基；

(2)将步骤(1)得到的基因片段与所述第一接头混合，以使所述第一接头与所述步骤(1)得到的基因片段相连，得到连接有所述第一接头的基因片段；

(3)以所述连接有所述第一接头的基因片段为模板，加入所述检测探针，通过PCR进行线性延伸，纯化得到延伸产物；

(4)以所述延伸产物为模板进行PCR扩增，纯化得到扩增产物，将所述扩增产物进行测序和比对，获得测序结果。

6.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当进行多靶点甲基化修饰检测时，所述检测方法包括：

(1)将所述待检测基因片段化形成基因片段，将所述基因片段进行末端修复以及在3’端加A碱基；

(2)将所述第一接头中的C碱基进行甲基化修饰后与步骤(1)得到的基因片段混合，使所述第一接头与所述步骤(1)得到的基因片段相连，再进行亚硫酸盐处理；

(3)以亚硫酸盐处理后的基因片段为模板，加入所述检测探针，通过PCR进行线性延伸，纯化得到延伸产物，其中，所述检测探针中的目标互补序列为亚硫酸盐处理后的待检测基因的互补序列；

(4)以所述延伸产物为模板进行PCR扩增，纯化得到扩增产物，将所述扩增产物进行测序和比对，获得甲基化修饰位点。

7.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当进行多靶点甲基化修饰和羟甲基化修饰，或羟甲基化修饰检测时，所述检测方法包括：

(1)将所述待检测基因片段化形成基因片段，将所述基因片段进行末端修复以及在3’端加A碱基；

(2)设置实验组，将所述第一接头中的C碱基进行甲基修饰后与步骤(1)得到的基因片段混合，使所述第一接头与所述步骤(1)得到的基因片段相连，依次用高钌酸盐、亚硫酸盐处理；

设置对照组，将所述第一接头中的C碱基进行甲基修饰后与步骤(1)得到的基因片段混合，使所述第一接头与所述步骤(1)得到的基因片段相连，再用亚硫酸盐处理；

(3)分别以所述实验组和所述对照组在步骤(2)得到的基因片段为模板，加入所述检测探针，通过PCR进行线性延伸，纯化得到延伸产物，其中，所述检测探针中的目标互补序列为亚硫酸盐处理后的待检测基因的互补序列；

(4)以所述延伸产物为模板进行PCR扩增，纯化得到扩增产物，将所述实验组和所述对照组的扩增产物进行测序和比对，获得甲基化和羟甲基化修饰位点。