[发明专利]一种放线菌素类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一株剑叶龙血树内生链霉菌(Streptomyces sp.)S011，其特征在于，分离自云南西双版纳剑叶龙血树茎组织，于2018年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.15910。

2.权利要求1所述剑叶龙血树内生链霉菌S011在生产放线菌素中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的放线菌素为放线菌素类化合物。

4.一种放线菌素类化合物，其特征在于，该化合物为去甲基放线菌素B，命名为：L-缬氨酸-N,N'-[(9,11-二甲基-5H-恶唑并[4,5-b]-吩恶嗪-4,6-双取代)二羰基]二[L-苏氨酰-D-缬氨酰-L-脯氨酰-N-甲基甘氨酰-N-甲基]内酯；其化学结构式如(I)

。

5.一种放线菌素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、菌株发酵：将权利要求1所述的链霉菌S011的孢子接种于增菌培养基上，28℃恒温培养3-5天，即得菌种；将灭菌后的PDA培养基趁热倒入灭菌后的培养皿中，25mL/平板，凝固后倒置备用；用灭菌的竹签挑取菌体，接种到PDA培养基上发酵，28℃下恒温培养11天；

步骤2、分离纯化：发酵11天后，将琼脂切块于玻璃容器中，用乙酸乙酯、甲醇和冰乙酸的混合液浸泡过夜后超声提取，过滤后提取液减压浓缩回收溶剂，室温吹干至无酸味，称取质量，样品备用；样品用等体积含10％甲醇的乙酸乙酯和水萃取多次直至乙酸乙酯相基本无色，分离乙酸乙酯相，经无水硫酸钠干燥后减压浓缩回收溶剂，得菌株EA提取物，EA经95％甲醇-石油醚分配法脱脂，得M相和PE相；将M相样品浓缩后经葡聚糖凝胶柱层析，将所得第一个组分进行反相硅胶柱层析，以甲醇：水(V：V)＝10：90～100：0梯度洗脱，60：40-80：20组分经HPLC制备，乙腈：水(V：V)＝40：60洗脱得权利要求4所述的放线菌素类化合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的增菌培养基的组分如下：麦芽提取物5g，酵母提取物4g，葡萄糖4g，微量盐溶液1mL，复合维生素微量，琼脂15g，水1000mL，pH7.2；发酵用的PDA培养基组分如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15g，水补至1000mL，pH自然，其中，土豆需要去皮切块煮沸30min，取滤液用。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，乙酸乙酯、甲醇和冰乙酸的混合液中的乙酸乙酯：甲醇：冰乙酸的体积比为80:15:5。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2中M相采用葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱层析，洗脱液为甲醇，20秒/滴。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2中第一个组分采用反相硅胶RP-18柱层析。

10.权利要求4所述的放线菌素类化合物在制备抗肿瘤和抑制耐药菌药物中的应用。