[发明专利]针对HBB-28地中海贫血基因的CRISPR单碱基供体修复体系在审
| 申请号： | 201811242124.5 | 申请日： | 2018-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN111088253A | 公开（公告）日： | 2020-05-01 |
| 发明（设计）人： | 包煜贤 | 申请（专利权）人： | 广州鼓润医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/85;C12N15/90;A61K48/00;A61P7/06 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 王磊;鲁兵 |
| 地址： | 511458 广东省广州市南沙区丰泽东路106号*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 针对 hbb 28 地中海贫血 基因 crispr 碱基 供体 修复 体系 | ||
1.一种针对HBB-28地中海贫血基因的CRISPR单碱基供体修复体系，其包含：
(1)CRISPR/Cas表达质粒、和
(2)包含正常HBB基因和阻断再次编辑的无义突变碱基的序列的供体。
2.根据权利要求1所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述CRISPR/Cas表达质粒包括针对HBB-28型突变位点的sgRNA序列和Cas9序列。
3.根据权利要求2所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述HBB-28型突变为A到G的单碱基点突变。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述CRISPR/Cas表达质粒是将Cas9序列和sgRNA序列克隆到真核表达载体上而构建的真核表达载体质粒。
5.根据权利要求4所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述真核表达载体包括PX330、pCDNA3.1、pMXs-IRES和pCDH-EF1-MCS。
6.根据权利要求4所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述sgRNA序列由序列表中SEQ ID No:1或SEQ ID No:2所示。
7.根据权利要求1或2所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述供体是5’和3’端2个碱基被硫代修饰的单链寡核苷酸ssDNA。
8.根据权利要求7所述的CRISPR单碱基供体修复体系，其特征在于：所述供体的序列由序列表中SEQ ID No:3所示。
9.权利要求1～8中任一项所述的CRISPR单碱基供体修复体系在制备HBB-28地中海贫血基因治疗的治疗剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的CRISPR单碱基供体修复体系作用于真核细胞；
所述真核细胞包括293TT细胞、SiHa细胞、HeLa细胞、HepG2细胞、MCF7细胞和U2OS细胞。
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