[发明专利]一种检测多种呼吸道病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测多种呼吸道病毒的引物组，还提供了一种检测多种呼吸道病毒的探针组，以及包括上述引物组与探针组的试剂盒和试剂盒的应用。本发明采用的引物组和探针组特异性好且检测灵敏度高，利用引物组及探针组配合2×NASBA反应液和5×NASBA反应酶混合液制成的试剂盒对待测样本进行扩增，再结合熔解曲线分析技术，操作简便，结果易于判读，可以实时地、快速准确地对不同NASBA扩增产物进行检测。

技术领域

本发明涉及一种检测多种呼吸道病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用。

背景技术

急性呼吸道感染是世界范围内导致儿童患病和死亡的重要原因。引起急性呼吸道感染的病原微生物十分复杂，包括：细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等，其中病毒最为常见。而呼吸道病毒感染所引起的症状没有特异性，无法依靠临床症状来确诊。目前，临床上较为常见的检测方法包括培养方法、生化方法和免疫方法等。其中，培养法操作复杂，检测周期长、费用高，不适合作为临床样品的常规检测。生化检测方法操作简单、快速，费用低，但该方法灵敏度和特异性不高，影响因素多，不能区分病毒的具体种类。免疫检测方法快速简便，但一个检测只能针对其中一种病毒。

核酸序列依赖扩增(NASBA)技术，于1990年由Guatelli等首先报道，主要用于特异性地等温扩增RNA。相比较而言，传统的PCR技术每次循环只产生双倍的复制子，而NASBA每次扩增可产生10-100倍的RNA分子，且可在30分钟产生多达10¹²个复制子，扩增效率明显高于普通PCR。目前NASBA技术已经被广泛应用于检测细菌和病毒的感染，其中包括弯曲杆菌，李斯特菌，沙门菌，HIV，HCV，禽流感病毒等。目前国际上对NASBA扩增产物的检测绝大多数采用开放式的核酸杂交探针检测体系，如采用酶联显色或化学发光进行结果评价，这就存在操作较为复杂及扩增产物污染易产生假阳性及假阴性的缺点与不足。

发明内容

本发明目的是为了解决现有技术中核酸杂交探针检测体系操作复杂且扩增产物污染易产生假阳性及假阴性的问题，提出一种检测多种呼吸道病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用。

一种检测多种呼吸道病毒的引物组，所述引物组包括以下至少两个引物对：

由序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的两条序列组成的针对甲型流感病毒的引物对；由序列表中SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的两条序列组成的针对乙型流感病毒的引物对；由序列表中SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的两条序列组成的针对副流感病毒1型的引物对；由序列表中SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的两条序列组成的针对副流感病毒2型的引物对；由序列表中SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的两条序列组成的针对副流感病毒3型的引物对。

优选地，所述引物对中的正向引物均在5’端添加T7RNA聚合酶识别的启动子序列，所述启动子序列为TAATACGACTCACTATAGGG。

本发明还提供一种检测多种呼吸道病毒的探针组，所述探针组包括以下至少2条分子信标荧光探针：

由序列表中SEQ ID NO.12所示的序列针对甲型流感病毒的分子信标荧光探针；由序列表中SEQ ID NO.13所示的序列针对乙型流感病毒的分子信标荧光探针；由序列表中SEQ ID NO.14所示的序列针对副流感病毒1型的分子信标荧光探针；由序列表中SEQ IDNO.15所示的序列针对副流感病毒2型的分子信标荧光探针；由序列表中SEQ ID NO.16所示的序列针对副流感病毒3型的分子信标荧光探针。

优选地，每一条所述分子信标荧光探针的两端分别带有荧光基团和淬灭基团。