[发明专利]一种检测多种呼吸道病毒的引物组、探针组和试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种引物组和探针组在制备检测呼吸道病毒试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物组为：

由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的两条序列组成的针对甲型流感病毒的引物对；

由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的两条序列组成的针对乙型流感病毒的引物对；

由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的两条序列组成的针对副流感病毒1型的引物对；

由SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的两条序列组成的针对副流感病毒2型的引物对；

由SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的两条序列组成的针对副流感病毒3型的引物对；

所述引物组中的正向引物均在5’端添加有能被T7RNA聚合酶识别的启动子序列，所述启动子序列为TAATACGACTCACTATAGGG；

相对应地，所述探针组为：

由SEQ ID NO.12所示的序列组成的针对甲型流感病毒的分子信标荧光探针，其5’端带有FAM荧光基团，3’端带有Dabcy1淬灭基团；

由SEQ ID NO.13所示的序列组成的针对乙型流感病毒的分子信标荧光探针，其5’端带有ROX荧光基团，3’端带有Dabcy1淬灭基团；

由SEQ ID NO.14所示的序列组成的针对副流感病毒1型的分子信标荧光探针，其5’端带有CY5荧光基团，3’端带有Dabcy1淬灭基团；

由SEQ ID NO.15所示的序列组成的针对副流感病毒2型的分子信标荧光探针，其5’端带有HEX荧光基团，3’端带有Dabcy1淬灭基团；

由SEQ ID NO.16所示的序列组成的针对副流感病毒3型的分子信标荧光探针，其5’端带有CY5荧光基团，3’端带有Dabcy1淬灭基团；

其中，所述试剂盒通过熔解曲线分析来区分各型靶标病毒，各型靶标病毒对应的荧光通道类型和熔解峰Tm值如下：

。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：Tris-HCl、KCl、MgCl₂、dNTP、rNTP、DTT、甜菜碱和DMSO、AMV反转录酶、T7 RNA聚合酶、RNase H、RNA酶抑制剂和BSA。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中溶质溶度如下：150mM pH8.3的Tris-HCl，200 mM KCl，30 mM MgCl₂，1 mM dNTP，4 mM rNTP，20 mM DTT，0.5 mM 甜菜碱，体积分数为20 %的 DMSO，1.6 U/μL AMV反转录酶，10 U/μL T7 RNA聚合酶，RNase H 0.05U/μL，3 U/μL RNA酶抑制剂，30 mg/mL BSA。