[发明专利]一种抗稻叶黑粉病的高产杂交水稻的育种方法

权利要求书

1.一种抗稻叶黑粉病的高产杂交水稻的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)筛选含有稻叶黑粉病高抗基因且农艺性状优良的不育系籼稻抗源，作为母本，筛选农艺性状优良的常规恢复系粳稻，作为父本，并鉴定其稻叶黑粉菌毒素的耐受浓度C₀；

所述稻叶黑粉菌毒素的耐受浓度的鉴定方法具体如下：

i.将常规恢复系粳稻父本的花药接种到离体培养基中，25℃离体培养50-55d，得到花药愈伤组织；

ii.在30组含有不同梯度浓度稻叶黑粉菌毒素提取液的分化培养基中接种花药愈伤组织，25℃诱导分化培养40-45d，筛选出花药愈伤组织分化率在1-2％范围内的稻叶黑粉菌毒素的浓度水平，计算浓度平均值，即为所述常规恢复系粳稻对稻叶黑粉菌毒素的耐受浓度C₀；

所述稻叶黑粉菌毒素提取液的制备方法如下：按1:2000的固液比稻叶黑粉病菌接种于PDA液体培养基中，25℃扩培3-5d，以25-35KHz、500W的超声波进行破壁处理，离心、灭菌后，即得稻叶黑粉菌毒素提取液；

(2)间行种植父、母本，扬花期进行人工授粉，收获F₁代杂交种；

(3)种植F₁代，进入分蘖期时，开始喷施浓度为C₁的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，且C₀＜C₁≤1.5C₀， 7天后，对未感染水稻单株，进行第二次喷施，喷施浓度为C₂，且C₁＜C₂≤1.3C₁，7天后，对未感染水稻单株，进行第三次喷施，喷施浓度为C₃，且C₂＜C₃≤1.2C₂，筛选出抗病水稻单株进行自交，收获F₂代杂交种；

(4)种植F₂代和父本，进行回交，进入灌浆期时，开始喷施浓度为C₃的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，筛选抗病、高产水稻单株，收获BC₁F₂代杂交种；

(5)种植BC₁F₂代和父本，进行回交，进入灌浆期时，开始喷施浓度为C₃的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，筛选抗病、高产水稻单株，收获BC₂F₂代杂交种；

(6)种植BC₂F₂代和父本，进行回交，进入灌浆期时，开始喷施浓度为C₃的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，筛选抗病、高产水稻单株，收获BC₃F₂代杂交种；

(7)种植BC₃F₂代，进行自交，进入灌浆期时，开始喷施浓度为C₃的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，筛选抗病、高产水稻单株，收获BC₃F₃代杂交种；

(8)种植BC₃F₃代，进行自交，进入灌浆期时，开始喷施浓度为C₃的稻叶黑粉菌毒素提取液进行炼苗，筛选出抗病、高产水稻单株，并对其进行分子标记辅助选择，收获阳性纯合单株种子，即得目标性状水稻新品种。

2.根据权利要求1所述一种抗稻叶黑粉病的高产杂交水稻的育种方法，其特征在于，所述离体培养基：MS培养基+1.2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+25g/L葡萄糖+8％琼脂。

3.根据权利要求1所述一种抗稻叶黑粉病的高产杂交水稻的育种方法，其特征在于，所述分化培养基：MS培养基+1mg/LKT+0.8mg/L 6-BA+1mg/LNAA+30g/L葡萄糖+8％琼脂+梯度浓度稻叶黑粉菌毒素提取液。