[发明专利]一种三七不定根的诱导方法

说明书

本发明公开了一种三七不定根的培养系统和诱导方法，主要包括：S1、组合培养基的配制，将蘸有植物激素的圆形滤纸片与MS琼脂培养基分层交替铺设；S2、植物激素分层吸附于不同位置，起到缓释和依次发挥作用的精准作用；S3、三七愈伤组织的诱导，取无菌外植体置于愈伤组织诱导滤纸片上，经过暗培养，获得三七愈伤组织；S4、三七不定根的诱导，愈伤组织吸收底层不定根诱导植物激素，不定根开始生长。本发明还保护一种培养基配制方法和操作工艺，为所述组合培养基和不定根诱导技术。本发明可以实现三七不定根的诱导率高，愈伤组织无需进行转接，生长周期短，收获方便，无需进行培养基分离，满足市场需求，具有重大的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种药用植物不定根诱导方法，特别涉及一种三七不定根诱导方法，属药用植物器官培养技术。

背景技术

三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)又称作田七，属于五加科人参属植物，明代药学家李时珍曾将其称为“金不换”。三七的生长条件较为苛刻，对温度、纬度、湿度等条件有较高的要求，其适应能力较低，因此限制了三七的生长区域，使其在我国只分布于云南文山州及广西靖西等地。

医学研究发现三七含有皂苷、黄酮、多糖等多种有效成份。经临床实践证明，三七在免疫调节、抗衰老方面具有良好的保健功能，在治疗血液系统、心血管系统疾病等方面具有明显的疗效。

近些年来在中药产业迅速发展的大环境下，由于对三七的深入研究，使三七产品不断被开发，三七药材和总皂苷的需求量也不断增长，组织培养再生三七不定根与种子繁殖方式相比具有周期短、不受四季气候限制、无重金属、农药等有害物质污染的优点，因此受到人们的广泛关注，被认为是一种有希望缓解土地资源短缺和中药材质量标准不一的重要途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种三七不定根的诱导方法。与传统种植方式相比，本发明重复性好、诱导率高、生长迅速、有效成分含量高、收获方便。

一种三七不定根的诱导方法，包括以下步骤:

S1、组合培养基的配制：

S11、滤纸片剪裁：取定性滤纸将其裁剪成与无菌组培瓶底部大小一致的圆形纸片，将其放入洁净的培养皿中牛皮纸密封，121℃、0.1MPa高温灭菌25min；

S12、MS培养基的配制：准确称取MS固体粉末溶于水，添加蔗糖和琼脂，调节pH＝5.8～6.0，121℃、0.1MPa高温灭菌25min后防止凝固，配制成蔗糖的浓度为30～50g/L，琼脂含量为8g/L的MS固琼脂养基，保温备用；

S13、上层愈伤组织诱导滤纸的制备：取0.5～1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)于超净工作台中采用孔径为0.22μm的滤膜进行过滤除菌，将4片步骤S11所得灭菌后的滤纸片叠放在一起，在2,4-D中浸泡20s，得上层愈伤组织诱导滤纸层；

S14、中层不定根诱导滤纸层的制备：取植物激素于超净工作台中分别采用孔径为0.22μm的滤膜进行过滤除菌后混匀，得混合植物激素1，所述混合植物激素1中含有1.0～2.0mg/L吲哚丁酸(IBA)、1.0～2.0mg/L 2,4-D、0.5～1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.2～0.5mg/L萘乙酸(NAA)；将4片步骤S11所得灭菌后的滤纸片叠放在一起，置于所述混合植物激素1中浸泡20s，得中层不定根诱导滤纸层；

S15、底层不定根诱导滤纸层的制备：取植物激素于超净工作台中采用孔径为0.22μm的滤膜进行过滤除菌后混匀，得混合植物激素2，所述混合植物激素2中含有2.5～5.0mg/L IBA、0.2～1.0mg/L NAA、0.2～0.6mg/L 6～BA、0.5～1.0mg/L激动素(KT)和50μmol/L茉莉酸甲酯；将4片步骤S11所得灭菌后的滤纸片叠放在一起，在混合植物激素2中浸泡20s，得底层不定根诱导滤纸层；