[发明专利]一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法

权利要求书

1.一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，其应用了一种杀虫白僵菌菌粉的培养基，该培养基包括斜面培养基、二级液体扩大培养基、三级固体扩大培养基；所述斜面培养基的组成成分以重量百分数计分别为：马铃薯20-25%、白砂糖1-3%、琼脂1-3%、余量水；所述二级液体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：黄豆粉1-3%、玉米粉1-3%、白砂糖1-3%、尿素0.02-0.1%、蛋白胨0.02-0.08%、磷酸二氢钾0.02-0.06%，余量水；所述三级固体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：麦麸60-70%、谷壳30-40%；所述黄豆粉、玉米粉的粒度为300-500目；所述马铃薯的制备方法为先将马铃薯去皮，再切片煮30min，过滤得到；

具体包括以下步骤：

步骤1、斜面菌种培养：取马铃薯、白砂糖、琼脂、水按比例混合制得斜面培养基，将原菌种放入斜面培养基接种，接种后的斜面培养基放入22-26℃恒温箱内培养，第1-2天着重检查有无细菌生长，如见斜面上有粘稠具光泽的薄膜出现即为细菌污染，应去掉，继续观察有无细菌生长，如有则重复上述操作至第15天，如无其他杂菌，则第一批斜面菌种制备完成；

步骤2、二级液体扩大培养：取黄豆粉、玉米粉、白砂糖、尿素、蛋白胨、磷酸二氢钾、水按比例混合制得二级液体扩大培养基，将配好的二级液体培养基装入容量为1000L的三角瓶内，装量为三角瓶容量的1/3，塞好瓶塞，高压灭菌，在无菌条件下每瓶接种一支试管步骤1制得的斜面菌种，接2-3瓶，接种后的二级液体扩大培养基置于往复式摇床上震荡10-14h，温度控制在22-26℃，频率80-100次/min，用电子显微镜检测孢子发芽率在85%以上即可做为二级液体菌种；

步骤3、三级固体扩大培养：取麦麸、谷壳按比例进行混合均匀制得三级固体扩大培养基，将5-10kg三级固体扩大培养基装入布袋或纤维袋，扎紧袋口置于灭菌锅炉中消毒，灭菌后的三级固体扩大培养基按20-25%的接种量加入步骤2制得的二级液体菌种，培养室及用具彻底消毒后，将接种后的三级固体扩大培养基平铺在簸箕内，厚度为0.6-1寸，进行浅盘发酵制得白僵菌；

步骤4、干燥、粉碎：将步骤3制得的白僵菌经烘干、粉碎由输送带输入储存罐中，再进行包装，贮存。

2.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述斜面培养基的组成成分以重量百分数计分别为：马铃薯20%、白砂糖2%、琼脂2%、水76%；所述二级液体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：黄豆粉1%、玉米粉1%、白砂糖1%、尿素0.06%、蛋白胨0.04%、磷酸二氢钾0.02%、水96.88%；所述三级固体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：麦麸60%、谷壳40%。

3.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤1中的原菌种是以白僵虫为标本，不断的分离提纯而获得。

4.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤1制备斜面菌种的批数是根据生产量而定的，每批的生产量在10吨以上。

5.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤2中接种后的二级液体扩大培养基置于往复式摇床震荡12h，温度控制在25℃，频率90次/min。

6.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤3中培养室及用具彻底消毒的步骤为：将用具在接种前洗净晾干放入培养室，然后将培养室用硫磺或40%的甲醛熏蒸。

7.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤3中浅盘发酵的具体步骤为：第1-5天内温度控制在22-24℃，当温度达到26-28℃时，打开窗门或用风扇进行降温至20-25℃，共计浅盘发酵15天。

8.根据权利要求1所述的一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其特征在于，所述步骤4中烘干操作在烘干房中进行，烘干房采用煤炉、电炉、暖气片加温，烘干温度30-35℃，烘干时间3-4天；粉碎收集时，白僵菌粉的细度在40目筛以上，待储存罐收有的菌粉含孢量为100亿/g时，将菌粉分袋包装，此时菌粉的活孢子率在85%以上。