[发明专利]呼吸道病原体快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合

权利要求书

1.一种呼吸道病原体快速荧光PCR检测试剂盒，包括扩增芯片和对照试剂，所述的扩增芯片由预分装并冻干在微流控芯片孔内的检测试剂构成；所述的对照试剂包含阴性对照和阳性对照；

所述的检测试剂包括成分为RT-PCR反应液，成分为Buffer、2.0mM dNTPs、1U/μL TaqDNA聚合酶，2U/μL M-MLV反转录酶，0.3U/μLRRI和9种呼吸道病原体16个型别检测引物探针。

2.根据权利要求1所述的呼吸道病原体快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的Taq DNA聚合酶选自Ex Taq HS、Platinum II Taq HS DNA polymerase、AmpliTaq GoldDNA polymerase中的任意一种；所述的反转录酶选自PrimerScript II RTase、PrimerScript RTase、Superscript IV中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的呼吸道病原体快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的Buffer包括10mM Tris-HCl，15mM KCl，3.5mM MgC_l2。

4.一种根据权利要求1-3中任意一项所述的呼吸道病原体快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于，微流体芯片含有16个反应孔，每孔可检测一种病原体型别，由相应的病原体检测引物探针和内参基因引物探针构成；

所述的9种呼吸道病原体包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、人偏肺病毒、人博卡病毒和鼻病毒；

所述的9种呼吸道病原体16个型别检测引物和探针的具体序列和序号如下：

甲型流感病毒上游引物F：CGAGGTCGAAACGTAYGTTCT SEQ ID NO.1

甲型流感病毒下游引物R：GGTCTTGTCTTTAGCCATTCCA SEQ ID NO.2

甲型流感病毒探针P：5’-荧光报告基团-CCCCCTCAAAGCCGAGATCGC-荧光淬基团-3’SEQID NO.3

乙型流感病毒上游引物F：CTTGTTGCCACTGATGATCTTA SEQ ID NO.4

乙型流感病毒下游引物R：ACTCCCACCGCAGTTTCAG SEQ ID NO.5

乙型流感病毒探针P：5’-荧光报告基团-CCATCGGATCCTCAACTCACTCTTC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.6

副流感病毒1型上游引物F：ACTAGGTGTGACAGACACAGCAA SEQ ID NO.7

副流感病毒1型下游引物R：TCCCCTATCAGCRGTGTCC SEQ ID NO.8

副流感病毒1型探针P：5’-荧光报告基团-TGCCACTTCTATRGCTCCACCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.9

副流感病毒2型上游引物F：ATGGGCCACAATCAATCCT SEQ ID NO.10

副流感病毒2型下游引物R：GCGACCACCATATACAGGAA SEQ ID NO.11

副流感病毒2型探针P：5’-荧光报告基团-CCTAGATGATAGATCCCGCTTCC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.12

副流感病毒3型上游引物F：GGACCACGCGCTCCATTCATCT SEQ ID NO.13

副流感病毒3型下游引物R：CCACTCCCATTGCATAACTCC SEQ ID NO.14

副流感病毒3型探针P：5’-荧光报告基团-ATAGTTGCCTGGTGCGAACTCACCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.15

副流感病毒4型上游引物F：CCCACTGGATCTGAAGAGAG SEQ ID NO.16

副流感病毒4型下游引物R：AATTTTCCTKGCATCTGTTTG SEQ ID NO.17

副流感病毒4型探针P：5’-荧光报告基团-TCYAACATCCTRCCCTGCTGCTTGT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.18

冠状病毒NL63上游引物F：ATTCCCAGGAATCTTGTCCCTA SEQ ID NO.19

冠状病毒NL63下游引物R：CTTTAGGAGGCAAATCAACACG SEQ ID NO.20

冠状病毒NL63探针P：5’-荧光报告基团-CGCCAACGCTCTTGAACATTCC-荧光淬基团-3’SEQID NO.21

冠状病毒OC43上游引物F：ACCGTATGCTAAAGACCAG SEQ ID NO.22

冠状病毒OC43下游引物R：CCTCATCGCTACTTGGGTCC SEQ ID NO.23

冠状病毒OC43探针P：5’-荧光报告基团-CTGATGTCAATACCCCGGCTG-荧光淬基团-3’SEQID NO.24

冠状病毒229E上游引物F：TGAAGGTGTTGTCTGGGTTGCT SEQ ID NO.25

冠状病毒229E下游引物R：GATTGAAGTGTGGTATCTCTG SEQ ID NO.26

冠状病毒229E探针P：5’-荧光报告基团-CTTGCGCCTAACACCGTAACC-荧光淬基团-3’SEQID NO.27

冠状病毒HKU1上游引物F：ACAGCTGATGGTCAACAAAAG SEQ ID NO.28

冠状病毒HKU1下游引物R：CGTGGGCATCACCATAGGA SEQ ID NO.29

冠状病毒HKU1探针P：5’-荧光报告基团-CTATCTCGGTACCGGYCCATATGCC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.30

中东呼吸综合症MERS-CoV上游引物F：ACTAATCGCCAGTACCATCAG SEQ ID NO.31

中东呼吸综合症MERS-CoV下游引物R：GTAGTACCAATGACGCAAGT SEQ ID NO.32

中东呼吸综合症MERS-CoV探针P：5’-荧光报告基团-AGTCCATGGCTGCAACTCGTG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.33

呼吸道合胞病毒上游引物F：ATGGGGCAAATATGGAAACA SEQ ID NO.34

呼吸道合胞病毒下游引物R：GCACCCATATTGTTAGTGATGC SEQ ID NO.35

呼吸道合胞病毒基因探针P：5’-荧光报告基团-CTTCACGAGGGCTCCACATACACA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.36

呼吸道腺病毒上游引物F：CACCCCCTCGATGATGC SEQ ID NO.37

呼吸道腺病毒下游引物R：CTCAGGTACTCCGAAGCATCCT SEQ ID NO.38

呼吸道腺病毒探针P：5’-荧光报告基团-TACATGCACATCGCCGG-荧光淬基团-3’SEQ IDNO.39

人偏肺病毒上游引物F：AARCATGCTATATTAAAAGAGTCTC SEQ ID NO.40

人偏肺病毒下游引物R：CCTATYTCTGCAGCATATTTGTAATC SEQ ID NO.41

人偏肺病毒探针P：5’-荧光报告基团-CAACHGCAGTGACACCYTCATCATTGCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.42

人博卡病毒上游引物F：GAAGAGACACTGGCAGACAAC SEQ ID NO.43

人博卡病毒下游引物R：CCACTGTGTCGGATCGG SEQ ID NO.44

人博卡病毒探针P：5’-荧光报告基团-CTGCGGCTCCTGCTCCTGTG-荧光淬基团-3’SEQ IDNO.45

鼻病毒上游引物F：GACATGGTGYGAAGAGYCTATTG SEQ ID NO.46

鼻病毒下游引物R：AAACACGGACACCCAAAGTAGT SEQ ID NO.47

鼻病毒探针P：5’-荧光报告基团-CCGGCCCCTGAATGCGGCTAAT-荧光淬基团-3’SEQ IDNO.48

人内参基因β-actin基因上游引物F：CGAGCGCGGCTACAGCT SEQ ID NO.49

人内参基因β-actin基因下游引物R：TCCTTAATGTCACGCACGATTT SEQ ID NO.50人内参基因β-actin基因探针P：5’-荧光报告基团-ACCACCACGGCCGAGCGG-荧光淬基团-3’SEQ IDNO.51。