[发明专利]一种肝片吸虫假定蛋白基因及胶体金免疫层析试纸

权利要求书

1.肝片吸虫假定蛋白基因在制备检测肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸条中的用途，其特征在于：

所示基因序列如SEQ No.1所示；

上述的一种肝片吸虫假定蛋白基因制备方法，包括以下步骤：

1）λ噬菌体插入基因的克隆

插入基因片段扩增引物序列由上海生工合成，如下：

F：5'-CTCGGGAAGCGCGCCATTGTGTTGGT-3'；

R：5'-ATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCC-3' ；

2）开放性阅读框 PCR 扩增

根据开放性阅读框基因序列，用 Primer5.0 软件进行引物设计，限制性内切酶分别为SacI、Hind Ⅲ：

F: 5’-CGAGCTCATGGTTCTTGCTGAGGAACGACAG-3’；

R: 5’-CCCAAGCTTTCAACTGACCATATCACCGAGATC-3’；

以肝片吸虫假定蛋白 D915_11650基因扩增产物为模板进行开放性阅读框的 PCR 扩增；

3）肝片吸虫假定蛋白 D915_11650基因克隆载体构建

将目的片段与 pMD-18T 载体连接， 连接产物转化入感受态，对重组质粒进行鉴定以及双酶切鉴定；

4）肝片吸虫假定蛋白 D915_11650表达载体构建

目的基因基因与 pET-28a 质粒连接，连接产物转化入感受态，并进行双酶切验证；

上述的一种检测肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸条制备方法，通过克隆、表达纯化肝片吸虫假定蛋白 D915_11650重组蛋白，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金对金黄色葡萄球菌A蛋白抗体进行标记，制备金标垫，组装试纸条，肝片吸虫假定基因 D915_11650蛋白作为检测线、兔抗SPA抗体作为质检线。