[发明专利]一种丛枝菌根真菌的简易保存方法

说明书

本发明提供了一种丛枝菌根真菌的简易保存方法，属于微生物保存技术领域。本发明提供的丛枝菌根真菌保存方法，包括以下步骤：1)采用湿筛倾析法和蔗糖离心法从盆栽扩繁菌剂中分离得到丛枝菌根真菌孢子，制得丛枝菌根真菌孢子悬浮液；2)以甘油、甘油和生理盐水、海藻糖和蔗糖作为冷冻保护剂，分别与上述孢子悬浮液混合；3)将混合液装入10ml离心管中，再将离心管装入自封袋中并利用硅胶进行干燥；4)然后将离心管置于‑20℃下预冻，最后置于‑80℃下进行保存。本发明方法操作简单，成本低廉，菌种活性保存效果较好，能成功地与寄主植物根系建立菌根共生体。

技术领域

本发明涉及微生物领域方面，具体涉及一种丛枝菌根真菌的简易保存方法。

背景技术

丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhiza fungi，AMF)通过侵染根系皮层细胞形成大量的丛枝结构，与植物根系形成互惠共生体。它能通过庞大的菌丝网络系统帮助寄主植物吸收各种营养元素，显著改善植物营养状况，提高植物的抗逆性，促进植物生长。然而，与其它菌根真菌不同，AMF是活体营养微生物，只能通过与寄主植物根系建立共生关系才能获得供其生长发育的营养物质，完成其生活史，因此，AMF的保存方法具有特殊性。

目前，AMF最普遍的保存方法主要是活体盆栽保存法，因其能长期保持AMF的生物活性，但该法费时、费力，需要较大的空间和温室条件，且还存在杂菌污染的风险，故不能被多数人使用。也有机构将AMF菌剂放置在4℃冰箱中保藏，但这种方法需要专门的设备，会占用大量空间，成本较高，且菌种活力下降较快，保存效果不佳。

发明内容

本发明是针对上述存在的技术问题提供一种丛枝菌根真菌的一种简易保存方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种丛枝菌根真菌的保存方法，该方法包括如下步骤：

(1)制备丛枝菌根真菌孢子悬浮液；

(2)配制冷冻保护液，灭菌后将冷冻保护液与上述孢子悬浮液均匀混合；

(3)将混合液装入离心管中，再将离心管装入自封袋中并利用硅胶进行干燥；

(4)将离心管置于-20℃下预冻，最后置于-80℃下进行保存，使用时在水浴锅中进行解冻。

本发明技术方案中：步骤(1)中所述的丛枝菌根真菌孢子悬浮液是通过以下步骤制备：

S1：将丛枝菌根真菌进行盆栽培养，3个月后收获地下部分，置于阴凉处自然风干，得到丛枝菌根真菌扩繁菌剂；

S2：采用湿筛倾析法和蔗糖离心法从盆栽扩繁菌剂中分离得到丛枝菌根真菌孢子悬浮液。

本发明技术方案中：步骤(1)中所述的丛枝菌根真菌孢子悬浮液的浓度为30～200个/ml。

本发明技术方案中：步骤(2)中所述的冷冻保护液为甘油的水溶液、甘油的水溶液和生理盐水的混合溶液、海藻糖溶液或蔗糖溶液。

本发明技术方案中：步骤(2)中甘油的水溶液中甘油的质量浓度为40～60％、生理盐水的质量浓度为0.5～1.5％，所述的混合溶液中甘油的水溶液和生理盐水混合的体积比为8：2、海藻糖溶液的浓度为0.2mol/L～0.5mol/L、蔗糖溶液的质量浓度为40～60％。

本发明技术方案中：所述丛枝菌根真菌孢子悬浮液与冷冻保护液的混合比例为1：1～3。

本发明技术方案中：步骤(2)中，所述灭菌在温度121℃，相对压力为0.12MPa下蒸汽灭菌10～30min。

本发明技术方案中：在步骤(3)中，所述干燥时间为24～48h。

本发明技术方案中：在步骤(4)中，所述预冻时间为12～24h；解冻的温度为30～40℃；