[发明专利]一种丛枝菌根真菌的简易保存方法在审
| 申请号： | 201811221229.2 | 申请日： | 2018-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN109207367A | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 孙锦;孔镭;刘铭铭;王战;宫筱雯;张晓琳;杨雅兰 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/04 | 分类号： | C12N1/04;C12N3/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 韩正玉;徐冬涛 |
| 地址： | 210043 江苏省南京市栖霞区八卦洲街道江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丛枝菌根真菌 保存 离心管 孢子悬浮液 甘油 蔗糖 装入 简易 微生物保存技术 冷冻保护剂 寄主植物 菌种活性 生理盐水 盆栽 共生体 海藻糖 混合液 离心法 自封袋 孢子 根系 硅胶 菌根 菌剂 扩繁 倾析 湿筛 预冻 成功 | ||
1.一种丛枝菌根真菌的保存方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)制备丛枝菌根真菌孢子悬浮液；
(2)配制冷冻保护液，灭菌后将冷冻保护液与上述孢子悬浮液均匀混合；
(3)将混合液装入离心管中，再将离心管装入自封袋中并利用硅胶进行干燥；
(4)将离心管置于-20℃下预冻，最后置于-80℃下进行保存，使用时在水浴锅中进行解冻。
2.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步骤(1)中所述的丛枝菌根真菌孢子悬浮液是通过以下步骤制备：
S1：将丛枝菌根真菌进行盆栽培养，3个月后收获地下部分，置于阴凉处自然风干，得到丛枝菌根真菌扩繁菌剂；
S2：采用湿筛倾析法和蔗糖离心法从盆栽扩繁菌剂中分离得到丛枝菌根真菌孢子悬浮液。
3.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步骤(1)中所述的丛枝菌根真菌孢子悬浮液的浓度为30～200个/ml。
4.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步骤(2)中所述的冷冻保护液为甘油的水溶液、甘油的水溶液和生理盐水的混合溶液、海藻糖溶液或蔗糖溶液。
5.如权利要求4所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步骤(2)中甘油的水溶液中甘油的质量浓度为40～60％、生理盐水的质量浓度为0.5～1.5％，所述的混合溶液中甘油的水溶液和生理盐水混合的体积比为8：2、海藻糖溶液的浓度为0.2mol/L～0.5mol/L、蔗糖溶液的质量浓度为40～60％。
6.如权利要求4所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：所述丛枝菌根真菌孢子悬浮液与冷冻保护液的混合比例为1：1～3。
7.如权利要求4所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：步骤(2)中，所述灭菌在温度121℃，相对压力为0.12MPa条件下蒸汽灭菌10～30min。
8.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于在步骤(3)中，所述干燥时间为24～48h。
9.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于在步骤(4)中，所述预冻时间为12～24h；解冻的温度为30～40℃。
10.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌保存方法，其特征在于：所述的丛枝菌根真菌为根内球囊霉或摩西球囊霉。
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