[发明专利]一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品

说明书

本发明“一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品”，属于医药领域，其毒株编号为DW55‑C20，保藏号为CGMCC No.13790。该毒株培养制得的纯病毒液滴度可到7.8±0.5LgCCID_50/ml。制成的含有辅料的剂型，其病毒含量不低于4.5LgCCID₅₀/mL。制成的疫苗制剂，纯度高，免疫活性高，具有良好的应用前景；本发明还提供了上述疫苗的制备方法，以及高效腺病毒毒株的筛选方法。

技术领域

本发明涉及病毒疫苗技术，更具体地涉及一株55型腺病毒及其制备的疫苗制品。

技术背景

腺病毒是一种常见的呼吸道和消化道病原体，可以引起各种症状表现，常在军营和学校爆发流行。在美国军队，腺病毒引起的急性发热呼吸道感染是一个重要的死亡原因。在健康的新兵中，超过50％的发热呼吸道感染和超过90％的肺炎由腺病毒引起。美国新兵训练营多次有腺病毒感染爆发流行，常有死亡病例报道，病死原因多为并发肺炎。根据国外文献报道，腺病毒感染引起的肺炎如果不进行治疗，死亡率可以高达50％。

腺病毒于1953年从人的增殖腺分离出来的，是一种无包膜的DNA病毒，可感染人和畜禽。腺病毒科分为哺乳动物腺病毒属和禽类腺病毒属，具有严格的寄主特异性，不感染其他动物，迄今共发现100余个血清型，其中人腺病毒有57种，分为7个亚群。

腺病毒是呈二十面体对称的线性双链病毒，病毒颗粒直径约65～80nm，由蛋白衣壳、核心蛋白和DNA组成。蛋白衣壳由六邻体(hexon)、五邻体(penton)和纤突(fiber)三种主要的蛋白构成，共252个壳粒，二十面体12个顶角的壳粒即为五邻体，每个五邻体上有1条纤突，剩下240个非顶角壳粒为六邻体。蛋白衣壳的表面有四种小蛋白IIIa，VI，VIII和IX。病毒核心有六种结构成分，分别是V、VII、TP、μ、IVa2和ATP，前五种与双链DNA的基因组有关，ATP在病毒粒子装配过程中至关重要的蛋白酶。Fiber蛋白的结构包括球部、柄部和尾部，长度约为10～30nm，纤突球部有HAdV不同组别和型别的抗原表位，且不同的HAdV 血清型纤突的长度和弯曲度均不同。每个六邻体蛋白是由基底部的五面体和塔尖的三角形组成，塔区有Loop1～Loop4四个环状结构构成，其中Loop1结构包括6个高变区，Loop2上有 1个高变区，7个高变区含有血清型特异的抗原决定簇。因此，编码六邻体和纤维蛋白的基因序列适用于人腺病毒血清型间基因差异分析。

历史上，腺病毒7型和腺病毒4型腺病毒在美国军队中是引起发热呼吸道感染的重要病原体。但是，近年来一个新的腺病毒亚型14型引发了一系列发热呼吸道感染，而且腺病毒 14型成为美军中腺病毒感染的主要亚型。在2004年到2007年期间,美国的传染病监测系统检测到17次腺病毒14型疫情，其中十例(60％)来源于美国军队。上述情况说明14型腺病毒在美国军队发病率较高。2006-2007年间美国New York，Oregon，Washington,Texas等四个州共确诊140例腺病毒14型腺病毒引起的呼吸系统感染，其中53例(38％)住院，24例(17％) 进入ICU，9例(5％)死亡。这些数字表明14型腺病毒具有较强的致病力。

腺病毒55型是由腺病毒14型演化而来，它的基因组的绝大部分区域和腺病毒14型高度同源，只有保护性抗原Hexon基因大部分来源于腺病毒11型，因此腺病毒55型为一种新型的重组腺病毒，该病毒的定型是由美国国立卫生研究院人类腺病毒专业委员会主席、中国病原微生物生物安全国家重点实验室客座教授Donald Seto于2010年正式定名。由于该病毒在抗原性及其编码基因上与11型腺病毒更加接近，过去被错误的定名为11a型。事实上，腺病毒55型与腺病毒14型的同源性远远高于和11型的同源性，而且从过去的几次在亚洲的流行特点来看，其感染特性和毒力也与腺病毒14型比较接近。