[发明专利]一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法

权利要求书

1.一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：样品前处理，所述前处理方法为：提取及分离后的含点翠胶黏剂的凝胶样品依次进行脱色-脱水-保温-再脱水-酶解-干燥处理；

步骤二：将步骤一处理后的样品用固相萃取柱脱盐、真空干燥后，溶于缓冲液A；离心处理，收集上清液，进行高效液相色谱分析检测，洗脱液为缓冲液B；所述缓冲液A为2％乙腈，0.1％甲酸；所述的缓冲液B为98％乙腈，0.1％甲酸；

步骤三：依次经过电喷雾和串联质谱分析；

步骤四：采用MASCOT软件在以脊索动物为种类限制的Uniprot蛋白数据库中进行检索分析。

2.根据权利要求1所述的一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：样品脱色方法为：将含有点翠文物样品提取物的凝胶的着色区域切成多个约1mm²的小块，分别用25mM的碳酸氢铵和50％的乙腈脱色2次，每次1h。

3.根据权利要求1所述的一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：脱水处理时选用100％的乙腈。

4.根据权利要求1所述的一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：高效液相色谱分析条件为：用自动进样器加入高效液相色谱的自制2cm C18柱及10cm C18柱中；样品加入的速率是15μL/min持续4min，洗脱速率为400nL/min持续91min，洗脱液浓度从2％线性增加到35％，然后在5min内线性增加到80％后持续8min，最终回到2％持续2min。

5.根据权利要求1所述的一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：串联质谱分析条件：质谱分辨率为60,000；串联质谱分析采用碰撞诱导解离模式，标准碰撞能量为35％，离子碎片用线性离子阱检测；10个丰度最高的离子计数在5000以上的母离子进入二级质谱分析；电喷雾电压为1.5kV；采用自动增益控制来防止离子阱过满，在离子阱中累积1×10⁴个离子来产生二级质谱；质荷比范围是350-2,000Da。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种用于点翠文物胶黏剂的鉴定方法，其特征在于：检索分析的检索参数为：胰蛋白酶模式，允许误切数2，脲甲基化是固定修饰，脱氨基化、氧化为可选修饰，母离子允许误差20ppm，碎片离子允许误差0.1Da；质量控制方法为假阳性率控制在1％以下；只有在鉴定出两条特异性肽段时可以实现蛋白鉴定；所有鉴定出的肽段都用BLAST在无冗余NCBI蛋白数据库中重新检索，以确定序列的特异性。