[发明专利]一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，包括包被有抗突变型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）的硝酸纤维素膜，偶联有鼠抗人IgG抗体的荧光微球结合物，抗突变型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗体系列校准品和样本稀释液。本发明采用免疫层析方法结合荧光微球偶联技术，在免疫层析分析的基础上结合荧光微球信号放大技术，利用荧光信号测量仪器即可测量出光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成比例关系，由此可建立校准曲线并计算出样品中待测物质的含量。本发明试剂盒具有较高等灵敏度和特异性，反应时间仅需10‑15min，方便快速，即适合大型医院检测，也适合基层医疗机构、社区医疗服务站、临床科室、门诊等即时检测。

技术领域

本发明涉及临床免疫检测技术，尤其是涉及一种采用免疫荧光法检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎（RA）是一种慢性全身性炎性疾病，是最常见的自身免疫疾病之一，在世界范围内发病率达 1%，在我国发病率约0.3%～0.6%。RA 的主要表现就是关节炎症导致的关节损伤和功能丧失。对RA 进行早期的诊断并立即采取适宜的治疗, 对于预防全部关节的损伤至关重要。而到目前为止，关节炎给机体带来的物理损伤还不能修复，所以要尽可能提前对疾病进行干涉治疗，以减少不可修复的损伤程度。这意味着RA的早期诊断和早期治疗对患者的生活质量至关重要。这也就要求我们要尽早对RA进行诊断，而血清学标记物的可检测阶段明显要早于临床指标。

RA的诊断标记物很多，主要包括类风湿因子RF、抗核周因子(APF)、抗角蛋白(AKA)、抗CCP、RA33，抗Sa、6-磷酸葡萄糖异构酶等等。类风湿因子RF及ACR标准对早期RA诊断效果并不好，而大部分标记物在特异性和敏感性方面都存在一些不足。目前应用得最为广泛的是抗CCP(环瓜氨酸肽)，这是一种人工合成的多肽，其最显著的性能就是有很好的特异性，但其敏感性不够高(不到70%)。

最近几年，一种新的诊断标记物---抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(抗MCV)的出现给RA，特别是早期RA诊断提供了一个全新的选择。在获得与抗CCP同样高的特异性的同时，抗MCV抗体的检测可以获得极好的敏感性(80%左右)。此外，研究还发现，抗MCV的水平变化可以有效监控RA的治疗过程。在一项对类克药物治疗的监控研究显示，抗MCV的水平变化要比抗CCP水平变化提早6个月出现，也就是说可以提前半年对治疗方案和药物选择提供有效建议。这也是自身抗体定量检测相对于定性检测的重要价值之一。抗MCV抗体在患者血清中出现的阶段也比其他标记物要更早，这对于RA的尽早诊断是极具意义的。

目前，抗MCV抗体检测有ELISA法、胶体金法等。ELISA法需要专用设备，反应时间比较长，检测步骤繁杂；胶体金法灵敏度和特异性较低，应用受到限制。截至目前，利用荧光微球标记技术针对抗MCV抗体进行快速定量检测的试剂盒在我国还是空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用荧光法快速、灵敏、准确定量检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，本发明还提供该试剂盒的制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，包括包被有抗突变型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）的硝酸纤维素膜，偶联有鼠抗人IgG抗体的荧光微球结合物，抗突变型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗体系列校准品和样本稀释液。

所述荧光微球包括不同粒径且能与活性物质结合的聚苯乙烯微球、Eu球或量子点微球。

所述抗突变型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）抗体系列校准品以突变型瓜氨酸化波形抗体阴性血清或分析缓冲液为校准品基质，加入抗MCV-IgG抗体阳性配制而成。

所述样本稀释液由0.1M磷酸缓冲液、1%吐温-20和0.5%酪蛋白组成。

所述抗突变型瓜氨酸化波形蛋白为天然纯化或基因重组等抗原。