[发明专利]一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：包括包被有抗突变型瓜氨酸化波形蛋白的硝酸纤维素膜，偶联有鼠抗人IgG抗体的荧光微球结合物，抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体系列校准品和样本稀释液。

2.根据权利要求1所述的检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述荧光微球包括不同粒径且能与活性物质结合的聚苯乙烯微球、Eu球或量子点微球。

3.根据权利要求1所述的检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体系列校准品以突变型瓜氨酸化波形抗体阴性血清或分析缓冲液为校准品基质，加入抗MCV-IgG抗体阳性配制而成。

4.根据权利要求1所述的检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液由0.1M磷酸缓冲液、1%吐温-20和0.5%酪蛋白组成。

5.根据权利要求1所述的检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒，其特征在于：所述抗突变型瓜氨酸化波形蛋白为天然纯化或基因重组等抗原。

6.一种检测抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：

第一步，制备包被有抗突变型瓜氨酸化波形蛋白的硝酸纤维素膜

取硝酸纤维素膜贴于不干胶衬板上，放置于划膜仪上，按照划膜仪操作规程，以1ul/cm的喷量进行膜的包被；其中检测线包被有浓度为0.5-1mg/ml的MCV蛋白，质控线包被有浓度为1-2mg/ml的羊抗鼠IgG抗体，包被后置于37℃干燥5小时备用；

第二步，制备偶联有鼠抗人IgG抗体的荧光微球结合物垫

用EDC溶液和NHS溶液活化荧光微球，将活化后的荧光微球进行超声，然后加入一定量的鼠抗人IgG抗体，置于振荡器上反应1～2h，用低温高速离心机离心后，弃去上清，将沉淀用含有蛋白的荧光微球保存液稀释混匀，超声分散后，将偶联结合物按照3ul/cm的量喷涂于聚酯玻纤上，置于37℃干燥5小时备用；

第三步，荧光层析试剂组装

将第二步制得的荧光微球结合物垫与第一步制得的硝酸纤维素膜的不干胶衬板进行组贴，形成荧光层析卡；将荧光层析卡切割成4.0mm宽的纸条，装配到塑料卡中并用铝箔袋密封包装；

第四步，制备抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体系列校准品

用抗突变型瓜氨酸化波形抗体阴性血清或分析缓冲液为校准品基质稀释抗MCV-IgG抗体高值阳性溶液，配置标定后的系列浓度为0U/ml、20U/ml、100U/ml、200U/ml、500U/ml、1000U/ml；

第五步：制备样本稀释液

采用0.1M磷酸缓冲液、1%吐温-20和0.5%酪蛋白配置样本稀释液。