[发明专利]酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法

说明书

本发明属中成药体内代谢研究技术领域，为解决目前酸枣仁入血成分定量分析中HPLC‑UV灵敏度低时间过长，不适合分析血浆中微量成分；LC‑MS/MS仅用于测定单一成分的药动学，不利于中药药动学的研究的问题，提供一种酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法。用UHPLC‑Q Exactive Orbitrap HR/MS同时定量测定酸枣仁水提物中9种入血成分；提高检测灵敏度，缩短分析时间；实现了对黄酮、皂苷和生物碱类三种极性化合物的同时定量分析；为酸枣仁在正常与PCPA失眠模型大鼠体内的药代动力学研究提供分析技术保障，为其他口服中药多组分同时定量分析提供参考。

技术领域

本发明属于中成药体内代谢研究技术领域，具体涉及一种酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法。

背景技术

酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Huex H. F. Chou的干燥成熟种子，具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津之功效，是临床上治疗失眠的首选药物。现代药理研究表明，酸枣仁中总皂苷、总黄酮、总生物碱是其发挥镇静催眠的主要活性成分。

众所周知，中药有效成分吸收入血是其疗效发挥的前提，且多成分、多靶点、多作用途径是其临床显效的特点。已有的植物化学研究表明，酸枣仁中化学成分结构丰富多样，以皂苷类、黄酮类和生物碱类为其主要的特征成分。目前有关酸枣仁的药动学研究主要集中于通过口服或静脉注射给予大鼠酸枣仁中某一单体成分或酸枣仁黄酮提取物等的研究。然而，酸枣仁水提物口服给药方式更接近临床的用药形式。且酸枣仁富含黄酮类、皂苷类、生物碱类和三萜酸类等多种结构类型的化学成分，而不同类型成分的药代动力学特征大相径庭。以一种成分代表一味中药的药动学行为在中药研究中不可行。此外，现阶段有关酸枣仁入血成分的定量分析主要是通过HPLC-UV和LC-MS/MS方法测定斯皮诺素及其衍生物6'''-阿魏酰斯皮诺素及酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B等几个化合物的药动学。HPLC-UV的分析灵敏度低，不适合分析血浆中的微量成分，且分析时间过长；LC-MS/MS虽然测定灵敏度高，但仅应用于测定了单一成分的药动学。

发明内容

本发明为了解决现阶段有关酸枣仁入血成分定量分析中HPLC-UV的分析灵敏度低，不适合分析血浆中的微量成分，且分析时间过长；LC-MS/MS虽然测定灵敏度高，但仅应用于测定了单一成分的药动学，不利于中药药动学的研究的问题，提供了一种酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法，以及在酸枣仁水提物口服给予正常和PCPA失眠模型大鼠的药动学中的应用。

本发明由如下技术方案实现：一种酸枣仁水提物中9种入血成分的同时定量测定方法，采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap HR/MS方法，同是定量测定酸枣仁水提物中9种活性成分：乌药碱、木兰花碱、维采宁、斯皮诺素、当药黄素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、6'''-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B；具体步骤如下：

（1）单一对照品储备液的制备：分别精密称定对照品，加入UHPLC-Q ExactiveOrbitrap HR/MS分析的色谱初始流动相，制备成乌药碱2.032 mg/mL、木兰花碱1.130 mg/mL的单一对照品储备液，加入甲醇制备成维采宁2.184 mg/mL、斯皮诺素2.016 mg/mL、当药黄素1.972 mg/mL、山奈酚-3-O-芸香糖苷2.058 mg/mL、6'''-阿魏酰斯皮诺素2.012 mg/mL、酸枣仁皂苷A 2.040 mg/mL、酸枣仁皂苷B 2.064 mg/mL的单一对照品储备液；