[发明专利]一种人源性肝硬化ECM生物支架的制备方法在审
| 申请号： | 201811206895.9 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109536436A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 张祯祯;陈娟;许红梅;张明满;符州 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学附属儿童医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 400014 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 生物支架 肝硬化 人源性 组织学检测 肝纤维化 强力振荡 生物研究 细胞残留 组织支架 无细胞 清洗 提示 发现 成功 研究 | ||
1.一种人源性肝硬化ECM生物支架的制备方法，包括以下步骤：(1)将离体的人硬化肝脏组织，用抗凝剂灌洗，去除脉管中的血细胞及血凝块，清洗，切割后进行低温冷冻；(2)将冷冻后的离体人硬化肝脏组织，进行融化，切割成小块；(3)将小块的人硬化肝脏组织，去除细胞，获得人源性肝硬化ECM生物支架。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述抗凝剂选自肝素、枸橼酸钠或二乙酸二乙胺。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述低温冷冻中的低温是-60～-100℃。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，融化时可将肝脏组织置于冰上、或将肝脏组织置于4℃条件下。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述小块的大小是(5～7)mm*(5～7)mm*(5～7)mm。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，切成小块的人肝硬化组织再次进行低温冷冻，所述低温冷冻中的低温是-60～-100℃。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，去除细胞的方法，包括如下步骤：1)将小块的人硬化肝脏组织置于超纯水或去离子水中，静置；2)继续于超纯水或去离子水中振荡；3)转移至SDS水溶液中，进行振荡；4)转移至曲拉通水溶液中，进行振荡；5)转移至超纯水或去离子水中，进行振荡。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，静置60～90min。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述SDS水溶液的质量体积比浓度是0.25％～0.5％。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中，所述曲拉通水溶液的质量百分浓度是1％-3％。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项，a)所述步骤2)中，振荡频率为4米/秒，每次振荡的时间为15-25s，共振荡20-30次；b)所述步骤3)中，振荡频率为4米/秒，每次振荡的时间为15-20秒，共振荡3-5次；c)所述步骤4)中，所述曲拉通水溶液可以用吐温水溶液代替；d)所述步骤4)中，振荡频率为4米/秒，每次振荡的时间为15～20秒，共振荡3～5次；e)所述步骤5)中，振荡频率为4米/秒，每次振荡的时间为15-20秒，共振荡3-5次。
12.如权利要求1-11之任一项所述制备方法获得的人源性肝硬化ECM生物支架。
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