[发明专利]用于敲除CXCL12基因的腺相关病毒重组载体及其构建方法和用途有效
| 申请号： | 201811204627.3 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109234314B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 陈意雄;蔡晓龙;邹杰;朱鹏飞;白易鑫 | 申请（专利权）人： | 汉恒生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N5/10;C12N15/66;A61K35/768;A61P35/00 |
| 代理公司： | 常州市权航专利代理有限公司 32280 | 代理人： | 黄晶晶 |
| 地址： | 201800 上海市嘉定*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 cxcl12 基因 相关 病毒 重组 载体 及其 构建 方法 用途 | ||
1.一种用于敲除CXCL12基因的腺相关病毒重组载体，其特征在于，所述腺相关病毒载体至少包括：如下可操作性连接的序列元件：
5’末端反相重复序列，CMV启动子，sacas9编码序列，polyA信号序列，U6启动子序列，gRNA序列，3’末端反相重复序列,所述gRNA序列如SEQ ID NO.1中第4600～4620位所示。
2.根据权利要求1所述的腺相关病毒重组载体，其特征在于：
所述重组载体序列如SEQ ID NO.1所示，
所述5’末端反相重复序列如SEQ ID NO.1中第1～141位所示；
所述CMV启动子序列如SEQ ID NO.1中第154～737位所示；
所述sacas9编码序列如SEQ ID NO.1中第762～3345位所示；
所述polyA信号序列如SEQ ID NO.1中第4137～4344位所示；
所述U6启动子序列如SEQ ID NO.1中第4351～4591位所示；
所述3’末端反相重复序列如SEQ ID NO.1中第4710～4850位所示。
3.如权利要求1～2任一项所述腺相关病毒重组载体用于制备胶质瘤治疗药物的用途。
4.一种细胞，其特征在于，所述细胞内含有如权利要求1～2任一项所述腺相关病毒重组载体。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括如权利要求1～2任一项所述的腺相关病毒重组载体和药学上可接受的载体，或者如权利要求4所述的细胞和药学上可接受的载体。
6.如权利要求1～2任一项所述用于敲除CXCL12基因的腺相关病毒重组载体的构建方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：
(1)gRNA设计和双链合成；
(2)AVV-sacas9重组载体构建。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中gRNA扩增时采用的正向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，反相引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
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