[发明专利]一种蝉拟青霉的人工培育方法及其培育的镇痛水提物

说明书

一种蝉拟青霉的人工培育方法，包括以下步骤：（1）菌种活化：从自然界分离选育了一株生命力强，镇痛代谢活性物质产量高的蝉拟青霉GZUIFR04606，将菌接种到PDA试管斜面上，25℃恒温培养7d；（2）种子培养：用接种环将已活化的试管斜面菌种接种到装有50mL液体培养基的250mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振荡培养72～96h；（3）发酵培养：将种子培养液按5%的接种量即7.5ml接种到装有150mL液体培养基的500mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振荡培养72～96h。以该蝉拟青霉为原料，用纯水匀浆，离心，经凝胶柱层析，得到具有活性组分的蝉拟青霉镇痛水提物。该蝉拟青霉镇痛水提物具有明显的镇痛作用，毒副作用小，稳定性好，无成瘾性。

技术领域

本发明属于虫草真菌发酵、有效部位提取及利用技术领域，具体 地涉及一种蝉拟青霉的人工培育方法及其培育的镇痛水提物。

背景技术

蝉拟青霉(Paecilomycescicadae)为大蝉草 (CordycepscicadaeS-hing)的分生孢子无性型阶段。蝉花是蝉在土 中的若虫被蝉拟青霉寄生致死的带菌尸体，在其头部长菌丝形成的孢 梗束似花蕾故名蝉花，由于蝉花生长的地理位置、生态环境的不同， 导致蝉花的形态各异。蝉花被视为“中药八珍”之一，在我国作为药 材使用已有悠久的历史，早在南北朝雷校《雷公炮炙论》就有加工记 载。蝉拟青霉中含有核苷类化合物、虫草多糖、虫草酸、蛋白质、氨 基酸、微量元素、SOD等多种活性物质,具有提高免疫力、抗炎、抗 疲劳、抗氧化、抗衰老、抗突变、抗肿瘤、镇痛、镇静等多种功效。

目前对冬虫夏草、古尼拟青霉、细脚拟青霉等相关研究表明：虫 草属及其无性型真菌对化学刺激引起的疼痛有明显的抑制作用(外周 镇痛作用)，对热刺激引起的疼痛未表现出镇痛作用(中枢镇痛作用)， 且未见成瘾性报道；而蝉花无性型—蝉拟青霉菌丝体的镇痛活性研究 报道较少。据此，本发明研究了蝉拟青霉菌株镇痛水提物的制备方法， 并对镇痛效果进行评价。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝉拟青霉的人工培育方法及其培育 的镇痛水提物，该方法从自然界分离选育了一株生命力强，镇痛代谢 活性物质产量高的蝉拟青霉GZUIFR04606(CGMCC No.16485)；采用 人工培育的方法进行蝉拟青霉发酵培养，以该蝉拟青霉为原料，用纯 水匀浆，离心，经凝胶柱层析，得到具有活性组分的蝉拟青霉镇痛水 提物。

本发明目的是通过下述方案得以实现：

一种蝉拟青霉的人工培育方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：从自然界分离选育了一株生命力强，镇痛代谢 活性物质产量高的蝉拟青霉GZUIFR04606(菌种保藏的分类命名：蝉 拟青霉(Paecilomyces cicadae)，保藏单位：中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.16485，保藏日期： 2018年9月25，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中 国科学院微生物研究所)；

将菌接种到PDA试管斜面上，25℃恒温培养7d；

(2)种子培养：用接种环将已活化的试管斜面菌种接种到装有 50mL液体培养基的250mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振荡 培养72～96h；

(3)发酵培养：将种子培养液按5％的接种量即7.5ml接种到装 有150mL液体培养基的500mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振 荡培养72～96h。

上述一种蝉拟青霉的人工培育方法培育的镇痛水提物，其制备包 括以下步骤：

(1)取人工培育的蝉拟青霉发酵产物，4000r/min，离心10-20min， 弃上清，得蝉拟青霉菌丝；

(2)用玻璃匀浆器破碎蝉拟青霉菌丝细胞，分别按菌丝体与超纯 水质量体积比kg：L＝1:4-1：10，在室温下，加入超纯水浸提3-5 次，得水提液；