[发明专利]一种蝉拟青霉的人工培育方法及其培育的镇痛水提物

权利要求书

1.一种蝉拟青霉菌株GZUIFR04606制备的镇痛水提物，其特征在于：该镇痛水提物的理化特征：

（1）外观性状：淡黄色澄清溶液；

（2）pH值：5-8；

（3）活性组分分子量：59622；

（4）蝉拟青霉水提物浓度为：0.1-1.0mg/ml；

（5）稳定性：-20℃保存6个月仍有活性；

它是按如下方法制成的：

一、蝉拟青霉菌株培育制备产物包括以下步骤：

（1）菌种活化：一株生命力强，镇痛代谢活性物质产量高的蝉拟青霉GZUIFR04606，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.16485，保藏日期：2018年9月25；

将菌接种到PDA试管斜面上，25℃恒温培养7d；

（2）种子培养：用接种环将已活化的试管斜面菌种接种到装有50mL液体培养基的250mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振荡培养72～96h；

（3）发酵培养：将种子培养液按5%的接种量即7.5ml接种到装有150mL液体培养基的500mL的三角瓶中，25℃，150r/min，摇床振荡培养72～96h；

二、镇痛水提物制备包括以下步骤：

（1）取人工培育的蝉拟青霉发酵产物，4000r/min，离心10-20min，弃上清，得蝉拟青霉菌丝；

（2）用玻璃匀浆器破碎蝉拟青霉菌丝细胞，分别按菌丝体与超纯水质量体积比kg ：L =1:4-1：10，在室温下，加入超纯水浸提3-5次，得水提液；

（3）上述水提液在4000r/min，离心10-20min，取上清液；

（4）上清液经SephadexG-25凝胶柱层析，得到活性组分；

（5）将水提物配制成含活性组分0.1-1.0mg/ml的水溶液，即为蝉拟青霉镇痛水提物。

2.如权利要求1所述的一种蝉拟青霉菌株GZUIFR04606制备的镇痛水提物，其特征在于：步骤二包括以下步骤：（1）人工培育的蝉拟青霉发酵产物，4000r/min，离心10-20min，弃上清，得蝉拟青霉菌丝10g；

（2）用玻璃匀浆器破碎蝉拟青霉菌丝细胞，按菌丝体与纯水质量体积比kg ：L比为1:8，加入80ml纯水，在室温下，加入超纯水浸提5次；

（3）上述水提液在4000r/min，离心10min，取上清液；

（4）上清液经SephadexG-25凝胶柱层析，得到活性组分；

（5）将水提物配制成含活性组分0.40mg/ml±0.02mg/ml的水溶液。