[发明专利]一种人参皂苷CK的制备方法

说明书

本发明公开了一种人参皂苷CK的制备方法，该方法采用混酸水解法制备人参皂苷CK，经过三七叶总皂苷的制备、人参皂苷CK的制备、纯化等步骤制得含量大于98%的人参皂苷CK，本发明方法转化效率高，转化产物容易分离去除杂质，用简单溶剂法处理即可得到含量大于90%的人参皂苷CK粗产品，避免了反复用硅胶柱、凝胶柱层析法才可以得到人参皂苷CK的弊端；本发明方法成本低、效率高，适于工业化生产和市场推广应用。

技术领域

本发明涉及一种人参皂苷CK的制备方法，属于提取物制备领域。

背景技术

人参皂苷CK是人参中二醇型人参皂苷在人肠道内的代谢产物，是人参在体内发挥活性的实体；生物活性研究表明人参皂苷CK是一个多靶点、高活性化合物，其不但在抗肿瘤、抗炎、保肝和抗过敏方面体现了良好的活性，而且在神经系统及免疫系统方面也具有很好的调节作用，具有抑制肿瘤细胞增殖和炎症、抗致癌和抗癌、抗过敏、缓解老年痴呆症的症状、抗糖尿及抗氧化因子促进夷岛素分泌、保护肝脏和皮肤。

人参皂苷CK稳定性差，人参皂苷在天然人参中并不存在，人参皂苷CK突出的药理活性引起了广泛的关注，寻找一条有效的获得途径成为迫切需求。世界上很多学者致力于CK的生产研究。人参皂苷CK 属于原人参二醇型皂苷，此类皂苷结构特点是具有相同的母核，不同点是在C-3 和C-20 位是由不同糖基构成。传统思维是通过利用酸碱水解的方法获得产物，但化学方法存在污染大，耗资大，水解副产物多等弊端；化学方法存在产物难以控制，难以获得单一性的目标产物，后续需要大量的分离工序，对环境污染比较严重等缺点。因此，相关研究逐年减少，现在多集中于生物转化法上，主要包括微生物转化和酶转化；文献报道中从人参中分离而得的人参皂苷β-葡萄糖甙酶转化效率较高，杂质少，但该酶不是单一化合物，很难人工制备，直接分离成本较高，很难适用于人参皂苷CK酶解制备方法的工业化。

发明内容

本发明提供了一种人参皂苷CK的制备方法，本发明采用弱酸混合酸水解法制备人参皂苷CK，该方法关键点在于控制转化时混合酸水解溶液比例、浓度和水解时间，避免了化学方法存在的产物难以控制，难以获得单一性的目标产物，后续还要大量的分离工序，对环境污染比较严重、目标产物收率低的问题。

本发明方法的步骤如下：

（1）以三七叶为原料，粉碎后采用质量浓度50-70%的甲醇溶液或乙醇溶液热回流提取2-3次，提取温度80-85℃，每次提取时间1-2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得三七叶粗提物；

（2）将步骤（1）三七叶粗提物经过苯乙烯大孔吸附树脂柱吸附三七叶总皂苷，水洗树脂柱到无色，然后用体积浓度70-75%的乙醇溶液解析三七叶总皂苷，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得三七叶总皂苷；

（3）在步骤（2）三七叶总皂苷中加入其质量4-6倍的无水乙醇、甲醇或正丁醇，水浴加热溶解，过滤得到三七叶皂苷澄清液，在三七叶皂苷澄清液中加入其质量3-5倍的乙酸乙酯或丙酮，边加边磁力搅拌，搅拌25-35min后，置于4℃下冷藏24小时，逐渐有白色沉淀析出，析出物为人参皂苷Rb3、Rb2、人参皂苷FC；过滤取白色沉淀，弃滤液；沉淀中按干燥品计算Rb3含量大于30%，Rb2含量大于20%，人参皂苷FC大于20%；

（4）在步骤（3）中白色沉淀中加入干燥白色沉淀质量9-11倍的纯水加热溶解，放冷后再加入溶液质量9-11%的冰乙酸-HCL溶液，混匀后于水浴60-80℃加热，当出现沉淀时，停止加热，完成反应；加热过程中出现大量白色沉淀，反应溶液中主要含人参皂苷CK和少量人参皂苷Rh2，沉淀主要含有人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和少量人参皂苷CK，其中冰乙酸-HCL溶液是冰乙酸与盐酸按体积比3-5:1的比例混合制得；

（5）步骤（4）反应结束后，向反应物中加入1-1.5mol/L的NaOH溶液调节pH值到中性，过滤得滤液和沉淀，沉淀反复用80-100℃热水洗涤3-4次，洗涤液合并入滤液中，滤液主含人参皂苷CK，沉淀为人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg3；