[发明专利]基于壳聚糖-铂纳米粒子催化显色体系的酪氨酸酶及其抑制剂的测定方法

权利要求书

1.一种基于壳聚糖-铂纳米粒子催化显色体系的酪氨酸酶的测定方法，其特征是将邻苯二酚和50 μL不同浓度的酪氨酸酶加入到200 μL pH 7，浓度为10 mmol/L的磷酸盐缓冲液中，混合均匀后在37℃下反应60分钟；然后依次将632.5 μL pH 4.5，浓度为50 mmol/L的磷酸盐缓冲液、50 μL浓度为3 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和17.5 μL壳聚糖-铂纳米粒子溶液加入到上述反应液中，混合均匀后再在37℃下反应5分钟；结束后，立即加入200 μL浓度为2 mol/L的硫酸溶液终止反应，测定溶液的吸光度值A₄₅₀；在0.5 ~ 2.5U/mL范围内，吸光度变化值△A₄₅₀与酪氨酸酶浓度呈双倒数线性关系，最低检测限为0.5 U/mL；所使用的壳聚糖-铂纳米粒子是用壳聚糖作为稳定剂，硼氢化钠还原氯铂酸得到，具体合成步骤如下：称取0.1 g壳聚糖溶解于50 mL体积分数为1%的醋酸中，搅拌15分钟使壳聚糖完全溶解即得到质量浓度为0.2%的壳聚糖溶液；将2 mL浓度为10 mmol/L氯铂酸加入到47 mL浓度为0.2%壳聚糖溶液中,涡旋搅拌30分钟，然后逐滴加入1 mL浓度为0.2 mol/L新配制的硼氢化钠溶液并在5分钟之内加完，置于暗处搅拌90分钟，得到壳聚糖-铂纳米粒子，所得产物避光冷藏保存。

2.根据权利要求1所述的一种基于壳聚糖-铂纳米粒子催化显色体系的酪氨酸酶的测定方法，其特征是所使用的邻苯二酚的体积为50 μL，浓度为2 mmol/L。

3.一种基于壳聚糖-铂纳米粒子催化显色体系的酪氨酸酶抑制剂的测定方法，其特征是将50 μL浓度为2 mmol/L的邻苯二酚和50 μL浓度为50 U/mL的酪氨酸酶溶液加入到200μL含不同浓度曲酸的pH 7，浓度为10 mmol/L的磷酸盐缓冲液中，混合均匀后在37℃下反应60分钟；然后依次将632.5 μL的pH 4.5，浓度为50 mmol/L的磷酸盐缓冲液、50 μL浓度为3mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和17.5 μL壳聚糖-铂纳米粒子溶液加入到上述反应液中，混合均匀后再在37℃下反应5分钟；结束后，立即加入200 μL浓度为2 mol/L的硫酸溶液终止反应，测定溶液的吸光度值A₄₅₀，计算抑制率；通过软件拟合得到曲酸的IC₅₀为0.057 mmoL/L；所使用的壳聚糖-铂纳米粒子是用壳聚糖作为稳定剂，硼氢化钠还原氯铂酸得到，具体合成步骤如下：称取0.1 g壳聚糖溶解于50 mL体积分数为1%的醋酸中，搅拌15分钟使壳聚糖完全溶解即得到质量浓度为0.2%的壳聚糖溶液；将2 mL浓度为10 mmol/L氯铂酸加入到47 mL浓度为0.2%壳聚糖溶液中,涡旋搅拌30分钟，然后逐滴加入1 mL浓度为0.2 mol/L新配制的硼氢化钠溶液并在5分钟之内加完，置于暗处搅拌90分钟，得到壳聚糖-铂纳米粒子，所得产物避光冷藏保存。

4.根据权利要求3所述的一种基于壳聚糖-铂纳米粒子催化显色体系的酪氨酸酶抑制剂的测定方法，其特征是所使用的酪氨酸酶溶液的体积为50 μL，浓度为50 U/mL。