[发明专利]HPLC同时定量测定水产品中乙酰甲喹及其主要代谢物的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC同时定量测定水产品中乙酰甲喹及其主要代谢物的方法，其采用二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液对虾类、蟹类、鱼类等水产样品进行提取后，采用正己烷去脂，再利用高效液相色谱‑紫外检测仪，以甲醇‑水混合液为流动相，可同时对乙酰甲喹及其5种主要代谢物进行定量检测，其操作简单、结果准确可靠。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种HPLC同时定量测定水产品中乙酰甲喹及其主要代谢物的方法。

背景技术

乙酰甲喹（Mequindox），又名痢菌净，化学名为3-甲基-2-乙酰基-喹啉-N1,N2-二氧化物，为卡巴氧类似物，是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所最早合成的一类新兽药。乙酰甲喹能促进动物生长，且对多数革兰氏阳性和阴性病原菌具有较强的抑制作用，因此在水产养殖中被广泛使用。但乙酰甲喹及其代谢物具有较强的光敏毒性和遗传毒性，对水生生态环境有潜在危害，且严重危害人体健康，故对乙酰甲喹及其代谢物进行准确、有效地检测是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HPLC同时定量测定水产品中乙酰甲喹及其5种主要代谢物的方法，其操作简单、结果准确可靠。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种HPLC同时定量测定水产品中乙酰甲喹及其5种主要代谢物的方法，其包括以下步骤：

1）将虾类去头、壳、肠线，蟹类去壳，鱼类去骨、内脏，取可食用部分进行匀浆（如不能及时检测，-18 ℃以下保存备用）；

2）取步骤1）所得浆液5 g（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加20 mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合液振摇混匀，超声提取15 min后，4000 r/min离心10 min，所得残渣再加入15 mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合液，重复提取1次；合并上清液于鸡心瓶中，40℃旋转蒸发至近干，得待测样品；

3）向所得待测样品中加入1.00 mL 38vol%甲醇溶液，再加入5 mL正己烷，漩涡混合1 min后转移至10 mL具塞离心管中，再于4000 r/min离心10min，弃去上层正己烷，取下层溶液过0.45 μm微孔滤膜，供液相色谱分析。

所述二氯甲烷-乙酸乙酯混合液中二氯甲烷的体积分数为75%。

所述液相色谱的条件为：色谱柱：C18色谱柱，150 mm×4.6 mm i.d.，粒径3.5 μm；流动相：甲醇-水混合液，梯度洗脱；洗脱程序为：0-8min，甲醇体积38%，8-11min，甲醇体积由38%提升到70%，11-17min，甲醇体积保持为70%，17-18min，甲醇体积由70%降至38%，18-22min，甲醇体积保持为38%；流速：0.8 mL/min柱温：35℃；进样体积：20 μL；紫外检测波长：240 nm。

本发明采用二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液对水产样品进行提取后，采用正己烷去脂，再利用高效液相色谱-紫外检测仪，以甲醇-水混合液为流动相，可同时对水产品中乙酰甲喹及其主要代谢物加氢乙酰甲喹（M1）、加氢脱一氧乙酰甲喹（M2）、加氢脱二氧乙酰甲喹（M10）、脱一氧乙酰甲喹（M3）、脱二氧乙酰甲喹（M4）进行定量检测，其操作简单、结果准确可靠。

附图说明

图1为6种标准品的光谱图；

图2为含6种标准品的标准工作液的液相色谱图；

图3为根据标准工作液中标准品浓度及其响应峰面积建立的标准工作曲线；

图4为待测虾肉样品经处理后的液相色谱图；

图5为待测鳗鲡肌肉样品经处理后的液相色谱图；

图6为待测蟹肉样品经处理后的液相色谱图；