[发明专利]实时荧光定量PCR检测PD-L1基因表达量的方法、引物及试剂盒

权利要求书

1.以待检测的PD-L1mRNA为模板的反转录引物基因序列，如SEQ ID NO:1所示。

2.如权利要求1所述的反转录引物基因序列在制备用于检测PD-L1基因表达量的实时荧光定量PCR检测方法的试剂盒中的用途。

3.如权利要求2所述的用途，所述检测方法包括如下步骤：

(1)反转录反应：同步提取样本中的RNA/DNA，以待检测的mRNA片段作为模板，通过权利要求1所述的反转录引物基因序列SEQ ID NO:1在反转录酶的作用下，自模板的3'端向5'端进行延伸反应，合成第一链cDNA；

(2)实时荧光定量PCR扩增反应：分别采用cDNA对应的特异性引物SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3及参照基因对应的特异性引物SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6为扩增引物，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7为特异性探针，以步骤(1)的反转录产物cDNA及参照基因DNA为模板，在DNA聚合酶作用下，实时荧光定量PCR扩增，同时扩增目的基因与参照基因，根据各自的标准曲线，得出各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的表达水平；

所述的参照基因DNA为RPPH1；

目的基因正向引物如SEQ ID NO:2所示，目的基因反向引物如SEQ ID NO:3所示，目的基因探针序列PD-L1P如SEQ ID NO:4所示；

参照基因正向引物如SEQ ID NO:5所示，参照基因反向引物如SEQ ID NO:6所示，参照基因探针序列RPPH1P如SEQ ID NO:7所示。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述待测mRNA为PD-L1基因转录产生的mRNA，来源于样本抽提。

5.据权利要求3所述的用途，其特征在于，反转录反应体系包括：dNTP Mixture，5*PrimeScriptIIBuffer，PrimerScriptIIRTase，RNase Inhibitor，RNase free dH₂O。

6.根据权利要求3-5任一项所述的用途，其特征在于，所述实时荧光定量PCR扩增反应为双通道荧光定量PCR扩增反应。