[发明专利]一种猪支原体肺炎气溶胶活疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种猪支原体肺炎气溶胶活疫苗及其制备方法，涉及动物疫苗领域。该气溶胶活疫苗，是将疫苗溶液雾化后得到的，所述疫苗溶液是将猪肺炎支原体弱毒株悬浮于疫苗稀释液后得到的；所述稀释液是含有如下成分的水溶液：聚乙二醇6000 10~50 g/L、环糊精1~10 g/L、硫代硫酸钠5~20 g/L、L‑组氨酸10~20g/L，pH值6.8‑7.6。本发明还提供该疫苗的制备方法，包括：将猪肺炎支原体弱毒株的菌液或冻干品，用疫苗稀释液配制溶液，通过超声雾化法制成气溶胶活疫苗；所述气溶胶活疫苗的空气动力学质量中位粒径为1‑5μm，有效抗原浓度不低于50%。本发明活疫苗，在空气中滞留30分钟后，仍然具有较高滴度，免疫保护率高、免疫持续期长，制备简单，成本低。

技术领域

本发明涉及动物疫苗领域，具体涉及一种猪支原体肺炎气溶胶活疫苗及其制备方法。

技术背景

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体感染引起的一种接触性慢性呼吸道传染病。本病遍布全球，并且易与其它病原发生混合感染，引起更严重的肺部病变，产生更大的经济损失。疫苗免疫是预防该病的主要方法。目前市场上可供选择的疫苗主要分为进口灭活疫苗和国产弱毒疫苗。由于猪肺炎支原体只局部定植于猪支气管、细支气管等下呼吸道，不随血液循环进入全身。因此猪支原体肺炎灭活疫苗免疫后产生的血清抗体与免疫保护无关，灭活疫苗免疫后也无法阻止猪肺炎支原体野毒对支气管纤毛的定植，因此免疫保护效率一般。而我国研制的猪支原体肺炎活疫苗(168株)直接将疫苗株接种至肺部，可模拟野毒感染产生长期的占位效应，而抑制野毒的感染；同时活疫苗免疫还可产生与免疫保护直接相关的呼吸道特异性黏膜sIgA抗体，免疫保护效果优良，2007在国内市场推广使用以来，临床使用效果显著。然而该活疫苗目前所采用肺内注射免疫途径不利于大规模推广，若能将猪支原体肺炎活疫苗制成雾化剂型，则不仅能提高疫苗接种的方便性，而且大大节省了劳动力和劳动时间，达到更好推广免疫该疫苗的目的，充分实现活疫苗优于灭活疫苗的特质。

要实现气溶胶疫苗的高效免疫就必须保证有足够多的活性疫苗株可以进入猪的下呼吸道。因此必须对气溶胶疫苗的粒径与活性两项参数进行严格监测。由于猪鼻甲骨与气管解剖结构的特点，只有空气动力学质量中位粒径(MMAD)为1～10μm的微粒经气雾以适当的角度可以进入呼吸道，其中粒径为1～5μm的颗粒可较为顺利地随呼吸进入支气管与细支气管，而较粗的颗粒大部分落在上呼吸道鼻腔黏膜上，无法对疫苗起到靶向作用。如果微粒太细(≤0.5μm)，则进入肺泡囊后又随呼气排出，所以必须将猪支原体肺炎雾化活疫苗的粒径控制在1～10μm内，最好是1～5μm之间。除了气溶胶疫苗粒径因素以外，气溶胶在发生过程中会有很多因素影响微生物的活力，比如气溶胶生成过程中的切削力、高压力影响气溶胶微生物活力的因素。气溶胶生成过程中的切削力和高压力越大，雾化粒子越小，但疫苗株的活力也越低。除了切削力、高压力等作用力外，影响气溶胶微生物活力的因素还有环境因素，如在低湿、高温环境下，雾化疫苗中水份快速蒸发，盐代谢失调和急剧的干燥作用、氧化作用使雾化疫苗活力大大降低。随着气溶胶在空气中持续时间的延长，环境对活性的影响会愈发明显。

专利号为201210275639.1、名称为“一种猪支原体肺炎雾化活疫苗的制备与检验方法”的发明专利，采用吹气式雾化法或水力式雾化法制备出粒径为1～10μm、瞬时滴度下降0.25～1个滴度以内的猪肺炎支原体气溶胶疫苗。在该发明专利中，采用的疫苗定量收集装置仅能收集雾化刚发生时、尚未完全分散并滞留在空气中一定时间的气溶胶疫苗(若雾化结束后收集，收集到的气溶胶疫苗较少，转化成液态苗的效率太低)，无法准确评价环境因素对气溶胶疫苗活性的影响。申请人在后续研究过程中发现，虽然疫苗溶液在刚形成气溶胶疫苗时，滴度下降较低，但是随着在空气中滞留时间的延长，活性下降显著，造成了免疫保护率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪支原体肺炎气溶胶活疫苗，在空气中滞留30分钟后，仍然具有较高滴度，免疫保护率高、免疫持续期长。

本发明的另一目的是提供猪支原体肺炎气溶胶活疫苗的制备方法，该方法简单，成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现。