[发明专利]一种注射用猪胎盘转移因子及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种注射用猪胎盘转移因子，属于生物医药技术领域。本发明所述制备方法将新鲜猪胎盘洗净，匀浆，得到猪胎盘匀浆液；猪胎盘匀浆液反复冻融5～7后，与pH值2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；浸提液经过双层过滤得到分离液，分离液加入壳聚糖作为絮凝剂，依次进行微滤和超滤，得到超滤液；调节超滤液的pH至和渗透压，除菌，即得注射用猪胎盘转移因子。本发明提供的注射用猪胎盘转移因子制备方法能够更好的完整保留注射用猪胎盘转移因子的活性，还可以缩短生产周期，提高转移因子的提取量，降低生产成本，适合大规模工业化生产。制备得到的注射用猪胎盘转移因子可用于制备免疫增强剂和疫苗佐剂。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种注射用猪胎盘转移因子及其制备方法和应用。

背景技术

转移因子是由动物蛋白细胞中具有免疫获悉的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质，可溶于水，能诱导机体免疫细胞活化，增强机体免疫力，能转移包括病毒、细菌、真菌、寄生虫、组织相容性抗原和肿瘤抗原等多种抗原的细胞免疫。由于转移因子使用安全、作用迅速、无抗原性同时作为免疫激发剂和辅助制剂可显著提高对动物疾病的预防和控制效果。

目前市场上存在很多猪、牛等诸多动物脾脏转移因子，但对于动物胎盘中提取转移因子较少。陈灵等研究了一种以猪胎盘为原料的提取方法，但是其提取产物的纯度不高，无法满足市场需求(陈灵，张利萍，罗永海，等.猪胎盘肽(胎盘转移因子)的提取制备及其性质研究[C]//上海市动物学会1999年年会.1999.)。

发明内容

有鉴于此，本发明为了解决以猪胎盘为原料无法得到高纯度、高产量转移因子的问题，本发明提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，时间短、质量可控，产量高，适宜大规模工业化生产。

为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，包括如下步骤：

(1)将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液；

(2)将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；

(3)将冻融液与pH值为2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；

(4)将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀；

(5)将分离液与壳聚糖混合后，依次进行微滤、超滤，得到超滤液；所述壳聚糖的质量与分离液的体积之比为0.5～2:100；

(6)将超滤液的pH值调节至6.8～7.2、渗透压调节至280～320mosm/kg，除菌，得到注射用猪胎盘转移因子。

优选的，所述步骤(1)中，将洗净后猪胎盘在60～80℃的水中浸泡3～5s再进行匀浆。

优选的，所述反复冻融中，冷冻温度独立的不高于-20℃，融解时间独立的不超过50min。

优选的，所述步骤(3)中，冻融液与pH值2～4的盐酸溶液体积比为1:1～2。

优选的，所述步骤(3)中，浸提时间为10～15h，搅拌速率为60～80r/min。

优选的，所述步骤(4)中，在得到沉淀后还包括将所得沉淀与水混合再次匀浆，反复冻融1～2次后进行双层过滤，所得滤液合并至分离液中。

优选的，所述双层过滤为依次以200目和300目滤网进行过滤。

优选的，所述步骤(5)中，微滤的滤网规格为0.22μm，超滤的超滤膜规格为6KD。

本发明上述技术方案所述注射用猪胎盘转移因子的制备方法得到的注射用猪胎盘转移因子，其中多肽含量不低于2mg/mL，核糖含量不低于45μg/mL。