[发明专利]一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用，制备方法步骤是：S1、取脐带血进行离心分层；S2、取一级下层沉淀加入无菌缓冲液再进行离心分层；S3、取二级下层沉淀，加入无菌红细胞裂解液进行离心分层；S4、取三级下层沉淀，加入无菌缓冲液进行离心分层；S5、分别取一级上层溶液、二级上层溶液、四级上层溶液，进行离心分层，离心分层后，收集所有沉淀，加入pH值7.0‑7.4、含有血清的培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中进行培养，每2‑3天更换培养基一次；S6、经培养处理，检测合格后，收集所有培养成分，离心收集脐带血再生粒子。本发明的脐带血再生粒子可以在组织细胞再生与修复中进行应用。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及再生医学、疾病治疗和药物用途 等，特别涉及一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用。

背景技术

损伤组织器官的再生与修复，其最终目标是通过再生组织细胞，实现器官 功能来达到治愈疾病的目标，再生出来的组织器官需要与个体可以长期共存， 因此，对于损伤组织器官再生研究中的核心挑战是开发其能够重构损伤组织器 官的细胞并能长期实现其功能的再生组合物。目前用于损伤组织的再生与修复 的方法主要有组织器官移植和干细胞治疗技术。

组织器官移植虽可以替换受损或患病的组织，但是受制于供体器官来源有 限和移植排斥等。

干细胞治疗技术前景光明，但存在的安全性风险尚待解决：异常的免疫反 应(异源细胞的免疫排斥以及异常炎症反应)；异常增生和促瘤、致瘤性：即 便是已在多国获批的骨髓间充质干细胞也具有危险的致瘤性，研究表明过量使 用成体间充质干细胞具有很大致瘤风险，可促进癌症生长转移；异常的分化行 为：非目标细胞分化、分化紊乱导致的增生性疾病和肿瘤，或细胞无效、低效 分化及提前老化导致的器官修复不全或器官衰竭等退行性疾病；对于基因修饰 的干细胞，存在导致基因突变和基因组疾病的风险。相关安全性问题的解决尚 有赖技术进步和研究深入。

发明内容

为了克服现有技术的缺点和不足，本发明的首要目的是旨在提供一种脐带 血再生粒子的制备方法；第二目的是旨在通过上述制备方法得到脐带血再生粒 子；第三目的是提供一种所述脐带血再生粒子在组织细胞再生与修复中的应 用。

本发明的目的是采用如下的技术方案来实现的：

一种脐带血再生粒子的制备方法，包含以下步骤：

(1)取脐带血进行离心，离心后分为一级上层溶液和一级下层沉淀；

(2)取一级下层沉淀，加入无菌缓冲液，进行离心，离心后分为二级上 层溶液和二级下层沉淀；

(3)取二级下层沉淀，加入无菌红细胞裂解液，置于水平摇床摇动，待 完全裂解后进行离心，离心后分为三级上层溶液和三级下层沉淀，三级上层溶 液直接弃掉。

(4)取三级下层沉淀，加入无菌缓冲液，剧烈晃动，之后进行离心，离 心后分为四级上层溶液和四级下层沉淀，四级下层沉淀直接弃掉。

(5)分别取一级上层溶液、二级上层溶液、四级上层溶液，进行离心， 离心后，收集所有沉淀，加入pH值7.0-7.4、含有血清的培养基，置于37℃、 5％CO2的培养箱中进行培养，每2-3天更换培养基一次。

(6)经培养处理，检测合格后，收集所有培养成分，离心收集脐带血再 生粒子。

以上所有步骤均在无菌环境下进行操作。

步骤(1)中所述的脐带血必须是新鲜、无菌、无病原体的。

步骤(1)、(2)中所述的离心，优选的离心力为30g-1000g。

步骤(2)、(4)中所述的无菌缓冲液，可以是现有技术已知的任何一种， 优选的是PBS缓冲液。