[发明专利]一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：

S1、取脐带血进行离心分层，离心分层后分为一级上层溶液和一级下层沉淀；

S2、取一级下层沉淀，加入无菌缓冲液，进行离心分层，离心分层后分为二级上层溶液和二级下层沉淀，该无菌缓冲液可以是现有技术已知的任何一种；

S3、取二级下层沉淀，加入无菌红细胞裂解液，置于水平摇床摇动，待完全裂解后进行离心分层，离心分层后分为三级上层溶液和三级下层沉淀，三级上层溶液直接弃掉，该无菌红细胞裂解液可以是现有技术已知的任何一种；

S4、取三级下层沉淀，加入无菌缓冲液，剧烈晃动，之后进行离心分层，离心分层后分为四级上层溶液和四级下层沉淀，四级下层沉淀直接弃掉，该无菌缓冲液可以是现有技术已知的任何一种；

S5、分别取一级上层溶液、二级上层溶液、四级上层溶液，进行离心分层，离心分层后，收集所有沉淀，加入pH值7.0-7.4、含有血清的培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中进行培养，每2-3天更换培养基一次；

S6、经培养处理，检测合格后，收集所有培养成分，离心收集脐带血再生粒子，所述经培养处理涵盖多种有效处理方式如洗涤/培养、过滤/培养。

2.根据权利要求1所述的脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S1中所述的脐带血必须是新鲜、无菌、无病原体的；步骤S1中所述的离心，优选的离心力为30g-1000g。

3.根据权利要求1所述的一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S2中所述的离心，优选的离心力为30g-1000g；步骤S2中所述的无菌缓冲液，优选的是PBS缓冲液；步骤S2中所述的取一级下层沉淀，加入无菌缓冲液，优选的是按体积比1:2-10加入无菌缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S3中所述的离心，优选的离心力为500g-5000g；步骤S3中所述的无菌红细胞裂解液，优选的是155mM NH₄CL或10mM KHCO₃或0.1mM EDTA；步骤S3中所述的二级取下层沉淀，加入无菌红细胞裂解液，优选的按体积比1:3-10加入无菌红细胞裂解液。

5.根据权利要求1所述的一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S4中所述的离心，优选的离心力为30g-800g；步骤S4中所述的取三级下层沉淀，加入无菌缓冲液，优选的是按体积比1:2-10加入无菌缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S5中所述的血清，优选的是自体脐带血血清；步骤S5中所述的培养基，优选的是MEM ALPHA培养基；步骤S5中所述的离心，优选的离心力为2000g-10000g。

7.根据权利要求1所述的一种脐带血再生粒子的制备方法，其特征在于：

步骤S6中所述的离心，优选的离心力为2000g-10000g；步骤S6中所述的经培养处理，优选的是洗涤/培养，培养天数可从0天到14天不等。

8.一种脐带血再生粒子，其特征在于，该脐带血再生粒子是通过权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到；该脐带血再生粒子的直径大小介于1μm-5μm之间；该脐带血再生粒子含有微量核酸成分；该脐带血再生粒子含有Oct4、Sox2、DDX4、Tubulin、Actin中的一种或多种蛋白成分。

9.一种脐带血再生粒子制剂及制剂组合物，其特征在于，该脐带血再生粒子制剂及制剂组合物包含权利要求8的脐带血再生粒子。

10.权利要求8所述的脐带血再生粒子在组织细胞再生与修复中的应用，其特征在于，所述脐带血再生粒子在应用时的使用剂量是每公斤体重用量为(0.1-10)x10¹⁰个脐带血再生粒子。