[发明专利]针对表皮生长因子受体和程序性死亡受体的双特异抗体

说明书

本发明提供了双特异性抗体，其包含结合于EGFR的第一结合结构域和结合于PD‑1的第二结合结构域，其中，所述抗体或其抗原结合片段是选自由单链抗体(scFv)、双抗体和上述形式的寡聚物所组成的组中的形式。本发明还提供了本发明抗体的氨基酸序列、克隆或表达载体、宿主细胞、以及用于表达或分离抗体的方法。还提供了包含本发明抗体的治疗组合物。本发明还提供了用双特异性抗体治疗癌症和其他疾病的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年9月29日提交的PCT专利申请序列号PCT/CN2017/104584的权益和优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及一种双特异性抗体，其包含结合EGFR的第一结合结构域和结合PD-1的第二结合结构域，其中，所述抗体或其抗原结合片段是选自由单链抗体(scFv)、双抗体和上述形式的寡聚物所组成的组中的形式。此外，本发明提供了一种编码该抗体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、宿主细胞、生产抗体的方法以及使用双特异性抗体治疗癌症、感染或其他人类疾病的免疫治疗方法。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)在多种人类癌症中均过度表达。EGFR可以由不同的配体激活。在这些配体中，EGF是EGFR的高亲和力配体。EGF与EGFR胞外区结合诱导受体二聚化。EGFR可能还与ErbB受体的另一成员，如HER2，配对形成异源二聚体。EGFR二聚化刺激其内在的激酶活性以及EGFR在几个位点的随后的磷酸化。该磷酸化诱导下游的激活和信号传递，并进一步启动一些信号转导通路，主要是MAPK、Akt和JNK通路，从而导致DNA合成和细胞增殖。整个EGF/EGFR通路诱导细胞分化、迁移、黏附和增殖。由于EGFR在多种人类肿瘤中过度表达，因此EGFR是靶向治疗的重要靶点。

两个EGFR靶向抗体，西妥昔单抗(Erbitux)和帕尼单抗(Vectibix)，已被美国食品药物管理局批准用于治疗结肠癌和头颈部癌。这些抗体阻断配体与EGFR和下游信号的结合，介导抗肿瘤免疫应答。

程序性死亡蛋白1(PD-1，CD279)是表达在活化的T细胞和其他免疫细胞上的CD28家族中的一个成员。PD-1的参与抑制这些免疫细胞的功能。PD-1有两个已知配体，PD-L1(B7-H1，CD274)和PD-L2(B7-DC，CD273)，两者都属于B7家族。PD-L1表达在各种淋巴和外周组织细胞类型中可诱导，而PD-L2更加局限于髓系细胞包括树突状细胞。PD-1通路的主要作用是下调组织和器官中的炎症免疫反应。

研究发现，在肿瘤微环境中，癌细胞能够通过上调PD-1/PD-L1通路而产生免疫逃逸(Boussiotis 2016 N Engl J Med)。这种机制特别见于具有EGFR基因激活突变的肿瘤中。PD-1通路上调可能是免疫逃逸的典型机制。作为证据，高PD-L1表达在EGFR突变的患者的肿瘤中被发现(Azuma 2014 Ann Oncol；Ramalingam 2016 J Thorac Oncol)。

事实上，尽管EGFR过量表达已在肺癌中被发现，但抗EGFR抗体尚未被批准用于肺癌治疗。抗EGFR治疗的初始效果经常受到这种靶向治疗的抵制而减弱，主要是由于EGFR突变所致。目前相比单独靶向EGFR的肿瘤治疗，并不知晓靶向EGFR通路和PD-1/PD-L1通路是否可能提供更有效的治疗。因此，本发明的目标是产生抗EGFR和PD-1双特异性抗体并且证明该抗体在癌症治疗中提供了一些优势。首先，双特异性抗体可用于肺癌治疗，而抗EGFR抗体尚未被批准用于EGFR过量表达的此适应症。第二，双特异性抗体可以逆转EGFR治疗的耐药性。同时与抗PD-1治疗相比，双特异性抗体可以增加PD-L1和EGFR双阳性的肿瘤的反应率。

发明内容

本发明提供了分离的抗体，特别是双特异性抗体。