[发明专利]抗人CD123的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗人CD123的嵌合抗原受体及其应用。本发明的识别CD123抗原的多肽包含如SEQ ID NO:4‑7所示的氨基酸序列，其作为(chimeric antigen receptor，CAR)结构中抗原识别区均能诱导CAR‑T细胞活化。抗CD123抗原的嵌合抗原受体在免疫细胞中表达后，不仅可以有效的清除表达CD123抗原的肿瘤靶细胞，而对阴性抗原(不表达CD123)的肿瘤细胞没有毒性作用；并且能够维持靶向CD123的CAR在病人细胞培养过程中的阳性率，在靶抗原刺激后能够长时间的进行增殖，能够用于肿瘤的靶向治疗。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗人CD123的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病，以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命；常规的诱导化疗虽然能够缓解AML但是最终并不能阻止AML的复发以及复发患者高的死亡率。然而AML的常规治疗已经50年未有改变，急需寻找新的改变。嵌合抗原受体T细胞技术在治疗表达CD19的急性淋巴细胞白血病(ALL)方面取得了优异的治疗效果，但是其靶点为CD19分子是否适用于AML需要进行探索。

CD123又称白介素3受体α链(IL-3Rα)高表达于白血病干细胞或白血病幼稚细胞，在正常造血干细胞不表达或者低表达，是白血病相关抗原也是急性髓性白血病的特异性抗原。CD123靶标的出现是AML治疗的新突破；由于CD123在AML高表达，理论上以CD123为靶标的免疫治疗具有更安全有效的治疗效果，国外也已经在进行以CD123为靶标的靶向药物的临床试验，但是功效均很有限并且仍有安全性问题的发生；因此需要寻找特异性更好更有效的靶向CD123的新疗法，目前虽然有一些靶点的CAR正在试验正在进行，但是用于治疗AML的CAR相对较少，在CAR性能的稳定性和安全性上仍需进一步的改造试验，如何选择更稳定适合的scFv(单链抗体)也是CAR研究中未能解决的关键问题，所以一种更安全有效的以CD123为靶点的CD123-CAR的研发制备是极有必要的。

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor)简称CAR，是模拟TCR功能的人工受体，由抗原识别域、铰链区和跨膜区及胞内信号域依次连接组成，胞内信号域通常为CD3ζ链或FcRγ，或与一种或多种共刺激分子相连，如4-1BB(CD137)，CD28，ICOS(CD278)。肿瘤细胞表面的抗原(受体)与嵌合抗原受体的抗体(配体)结合时，通过铰链区和跨膜区将信号传递至胞内，胞内信号域将信号转化为活化信号，激活效应细胞，效应细胞增殖、产生细胞因子从而杀伤肿瘤细胞。CAR-T治疗不同的肿瘤疾病针对的抗原不同，不同的抗原抗原结合位点不同，需要完全不同的scFv识别。又因为不同抗原大小不同，scFv亲和力不同，CAR结构中的scFv要正常发挥作用与铰链区密切相关，而哪种scFv最适合选择哪种铰链结构目前并没有研究，需要经过大量实验摸索。

单链抗体作为CAR结构中重要的组成部分，其选择对CAR-T疗效起到至关重要的作用，传统的鼠源抗体，因为鼠抗的异质性会引起人抗鼠抗体反应(Human anti-mouseantibody reaction，HAMA)，导致CAR-T在循环系统中被很快清除，失去疗效。因此，治疗用鼠源单抗需要进行人源化修饰以提高抗体的人源化程度、减弱HAMA。但是抗体的改造通常会导致抗体失去原有抗原结合活性，因此需要对影响抗原抗体结合的关键残基进行反复修改，而后通过大量抗原抗体结合特异性、亲和力检测，从而筛选得到具有活性的抗体序列。

因此，改造适用于CAR-T治疗的scFv以及筛选适合改造的人源化scFv的CAR结构对于解决利用靶向CD123的CAR-T治疗AML是很有必要的。

发明内容