[发明专利]一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的重组菌的构建及应用有效
| 申请号： | 201811119484.6 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN109266595B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 刘立明;张君轩;付妍;刘佳;宋伟;张灿 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P13/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 苏氨酸 生产 氨基 丁酸 重组 构建 应用 | ||
1.一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的重组菌，其特征在于，所述重组菌是以大肠杆菌为宿主，双质粒表达系统表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶、亮氨酸脱氢酶，所述双质粒表达系统包括PETDuet-1质粒和pRSFDuet-1质粒；所述PETDuet-1质粒用于表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶，所述pRSFDuet-1质粒用于表达亮氨酸脱氢酶；所述甲酸脱氢酶、苏氨酸脱氨酶在PETDuet-1质粒上顺次连接；所述苏氨酸脱氨酶选自大肠杆菌，所述亮氨酸脱氢酶选自苏云金芽孢杆菌；所述甲酸脱氢酶选自假丝酵母；所述甲酸脱氢酶经过密码子优化，优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；所述苏氨酸脱氨酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:5；所述亮氨酸脱氢酶氨基酸序列为SEQ ID NO:6。
2.根据权利要求1所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的重组菌，其特征在于，所述宿主为E.coli BL21。
3.一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述方法利用权利要求1～2任一所述的重组菌将底物转化为L-2-氨基丁酸，并偶联辅酶再生体系。
4.根据权利要求3所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述辅酶再生体系以甲酸铵为底物，通过甲酸脱氢酶将NAD+转化为NADH的辅酶再生系统。
5.根据权利要求4所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述底物中L-苏氨酸浓度为30～40g/L，甲酸铵浓度为10～30g/L，NAD+浓度为0.4～1.0g/L，所述重组菌经培养后以菌液的形式添加，转化温度为30～40℃，转化pH为7.0～8.5。
6.根据权利要求5所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述菌液的制备方式为离心收集菌体后溶于pH为7.0～8.5的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，菌液的添加量为30～50g/L。
7.权利要求1-2任一所述的重组菌在转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸中的应用。
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