[发明专利]一种高效识别蛋白丝氨酸庚糖基化的多克隆抗体、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种含有丝氨酸庚糖基化修饰的糖肽，其特征在于，所述糖肽的结构如下所示：

2.如权利要求1所述糖肽的合成方法，其特征在于，所述糖肽的合成方法如下：

(1)化合物2在醋酸酐和碘的作用下得到化合物3；

(2)化合物3在三氟化硼乙醚的催化下，端位与对甲苯硫酚偶联得到化合物4；

(3)化合物4先后与甲醇钠和TBDMSSCI反应得到化合物5，化合物5在BnBr、NaH、TBAI、DMF的作用下得到化合物6；

(4)化合物6在醋酸和TBAF的作用下得到化合物7；

(5)化合物7在戴斯马丁氧化剂作用下得化合物8；

(6)化合物8经过Wittig反应得到糖烯9；

(7)糖烯9在AD-mix-α的催化下得到化合物10a，糖烯9在AD-mix-β的催化下得到化合物10b；

(8)化合物10a在NB和醋酐吡啶的作用下得到化合物12a；化合物10b在醋酐吡啶的作用下得到化合物11b；

(9)化合物12a在醋酸肼、三氯乙腈和DBU的作用下得到化合物14a，即活化的三氯亚胺酯；化合物11b在NIS和三氟甲磺酸银的作用下得到化合物12b；

(10)化合物14a在三氟甲磺酸酯的作用下得到化合物15a；化合物15a在三氟乙酸的作用下得到化合物16a；化合物12b在三氟甲酸的作用下得到化合物13b；

(11)以2-氯三苯甲基树脂作为固相载体，在醋酐吡啶的作用下，将Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、16a和Fmoc-Gly-OH依次连接到载体上，之后用柔和切割试剂将糖肽连同保护基从树脂上切下，得到全保护的糖肽18a；以2-氯三苯甲基树脂作为固相载体，在醋酐吡啶的作用下，将Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、13b和Fmoc-Gly-OH依次连接到载体上，之后用柔和切割试剂将糖肽连同保护基从树脂上切下，得到全保护的糖肽18b；

(12)化合物18a在氯化钯、氢气和乙醇钠的作用下得到糖肽粗品1，糖肽粗品1纯化后得到糖肽1a；化合物18b在氯化钯、氢气和乙醇钠的作用下得到糖肽粗品2，糖肽粗品2纯化后得到糖肽1b；

3.由权利要求1所述含有丝氨酸庚糖基化修饰的糖肽与载体蛋白交联的化合物。

4.根据权利要求3所述化合物，其特征在于，所述载体蛋白是BSA，所述的交联是糖肽的羧基端与载体蛋白BSA偶联。

5.特异性识别权利要求1所述含有丝氨酸庚糖基化修饰的糖肽的抗血清或抗体。

6.如权利要求5所述抗体的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：

a)ProteinA纯化：纯化系统：AKTA purifier 10，填料：ProteinA Sepharose 4FastFlow；平衡缓冲液：20mM PBS，0.15M NaCl，pH7.2，洗脱缓冲液：0.1M glycine-HCl，pH2.8，上样流速：1ml/min，流程：平衡柱子→上样→再平衡→洗脱，洗脱后样品用1M Tris-HCl调pH至中性，PBS透析过夜；

b)特异性纯化：纯化系统：AKTA purifier 10，填料：BSA Sepharose 4Fast Flow&CL5(SH)-BSA Sepharose 4Fast Flow，平衡缓冲液：20mM PBS，0.15M NaCl,pH 7.2，洗脱缓冲液：0.1M glycine-HCl，上样流速：1ml/min，流程：平衡柱子→上样→收集流穿→再上样→收集流穿，洗脱后样品用1M Tris-HCl调pH至中性。

7.权利要求5所述抗体在检测6位L型丝氨酸庚糖基化修饰的蛋白和6位D型丝氨酸庚糖基化修饰的蛋白中的应用。

8.权利要求5所述抗体在制备抗体类抗生素中的应用。

9.权利要求5所述抗体在小分子抗生素筛选中的应用。