[发明专利]一种金线莲种质的试管苗慢生长保存方法

说明书

本发明提供了一种金线莲种质的试管苗慢生长保存方法，该方法包括以下步骤：S1、外植体的取材与消毒；S2、接种与诱导；S3、继代增殖；S4、试管苗低温胁迫处理；S5、试管苗慢生长保存；S6、试管苗复壮；S7、试管苗生根；S8、移栽。本发明通过改变种质材料生长的微环境条件，有效延缓了试管苗的生长速度，延长了继代培养周期，种质保存时间长达3‑4年，并且遗传性状稳定、种质存活率高、复壮效果显著，对进一步保护金线莲资源和研究、开发利用金线莲都具有重要意义。

技术领域

本发明属于农林领域的药用植物生物技术，具体涉及一种金线莲种质的试管苗慢生长保存方法。

背景技术

金线莲（Anoectochilus roxburghii）即花叶开唇兰，别名金蚕、金线兰、金石松、金线虎头蕉、金线入骨消等，是兰科开唇兰属的一种多年生草本植物；其叶片圆盾形，表面黑棕色，下面暗红色，绒布状明显，有金色网状叶脉名为“金线”， 叶基部鞘状包茎形成鞘节，质厚实挺拔似莲，因而得名金线莲。金线莲性喜阴凉、潮湿，尤其喜欢生长在有常绿阔叶树木的沟边、石壁、土质松散的潮湿地带，一般分布在海拔300~1200米的丘陵地。我国多在福建、广东、广西、台湾、四川、贵州、云南等省分布。金线莲是珍稀的药用植物，具有多种显著的药用价值和保健功效。金线莲素有“金草”、“神药”、“乌人参”等美称，全草入药，在民间治疗范围较广，具有清热凉血、祛风利湿、解毒、止痛、平衡阴阳、扶正固本，阴阳互补、生津养颜、调和气血、五脏、养寿延年等功效，主治咯血、支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、急慢性肝炎、重症肌无力等病症。近年来的研究表明，金线莲含有挥发油、多糖、黄酮、苷类化合物、甾体化合物、有机酸、三萜类、生物碱、核苷类、氨基酸、微量元素等其他多种成分，其中多糖、黄酮、挥发油被认为是金线莲药效的重要成分，具有增强机体免疫力、保肝抗癌的作用。正是由于金线莲对疾病的治疗及养生保健具有良好的效果，其市场需求量巨大，开发前景极为广阔。

在自然条件下，金线莲对生长环境的要求极为苛刻，常零星分布于植被完整、相对湿度高、腐殖质丰厚的林下地表层，而且金线莲种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才促进种子萌发生长，但发芽率非常低，因此野生资源更新非常缓慢。在早期市场上金线莲的货源主要来自于野生采挖，长期的挖采使其自然生长环境遭受严重破坏，进而导致了野生金线莲种群数量急剧减少。近年来，金线莲人工栽培面积迅速扩大，用来弥补野生金线莲的不足。但是人工栽培的种源大多来自于野生资源，不同种源的金线莲其株高、地径、叶长、植株鲜重等形态学性状以及多糖、黄酮等化学成分均存在差异，以致产量与内在质量不稳定，严重影响了药材的质量。

优良的种质资源不仅是提高中药材质量的关键和源头，还是金线莲品种选育与改良的物质基础。因此开展金线莲种质资源评价研究，并对收集的种质资源加以妥善保存和利用，有利于发掘和利用金线莲优良遗传性状，是推动金线莲产业发展的一项重要工作。目前，金线莲的组织培养技术日趋成熟，在此基础上可以开展种质资源的离体保存。种质离体保存即种质试管苗保存，该方法具有许多优点：首先，植物的生长都在人为控制的环境下进行，这使植物免受病虫及环境气候条件的选择，从而保持一定的基因稳定性；其次，通过离体培养，可以在短期内在数量上形成一定的规模，可以随时用于品种改良与育种研究；其三，离体培养材料体积小，且不携带病菌，因而有利于在国家或地区间进行运输与交流。目前金线莲种质的试管苗保存方法尚未建立，因此开展对金线莲生长特性以及组培繁殖的深入研究，探索建立保存时间久、种质存活率高、稳定可靠的金线莲种质保存方法对金线莲产业的长远发展具有重要的意义。

发明内容

针对目前缺乏有效的金线莲种质资源保存方法的问题，本发明提供一种金线莲种质的试管苗慢生长保存方法，用来保存金线莲的野生种质资源以及人工栽培的优质种源，有利于金线莲遗传多样性的延续，也满足科学开发利用金线莲种质资源的需要。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种金线莲种质的试管苗慢生长保存方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：