[发明专利]一种中华鳖基因组微卫星多重PCR体系构建方法

权利要求书

1.一种使用公共数据快速构建10×以上中华鳖微卫星标记多重PCR体系进行基因分型的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)使用公共数据库获取中华鳖基因组序列；

2)分析中华鳖基因组序列，获取中华鳖微卫星位点信息；

3)对全部微卫星位点进行引物设计；

4)将全部位点按照产物大小90bp-180bp，180bp-260bp，260bp-400bp进行区间分组，从每组中随机选取12个标记/套多重PCR体系合成引物；

5)使用8个或以上中华鳖个体基因组验证每个位点的多态性以及产物的扩增情况，剔除产物不能扩增及PCR产物无多态性的位点；

6)按照步骤4)的分组，使用AutoDimer软件计算多态位点组内和组间引物的序列相容性，保留序列相容性最强的12个位点；

7)为每组中每个位点的上游引物标记一种不同颜色的荧光；所述12个位点的位点信息以及引物序列如下表所示：

8)按照每个位点上游引物0.4μM，下游引物10μM的浓度配制引物预混液，将全部位点的引物预混液等体积混合配制多重PCR引物工作液，构建微卫星多重PCR反应体系；

9)使用常规PCR方法对多重PCR体系进行扩增，使用毛细管电泳对扩增产物进行基因分型。