[发明专利]一种检测以DAP12作为胞内信号结构CAR-T细胞的方法及其试剂盒在审
| 申请号： | 201811100676.2 | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109182470A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 王恩秀;汪晨;武国英 | 申请（专利权）人： | 南京卡提医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 杜静;徐冬涛 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市高新区新*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 信号结构 试剂盒 种检测 实时荧光定量PCR 基因组DNA提取 快速定量 临床治疗 上游引物 特异性强 下游引物 准确定量 基因组 检测体 外周血 可用 探针 体内 细胞 | ||
1.一种检测以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞的方法，其特征在于，所述方法以能够跨越DAP12-T2A的核苷酸序列作为检测的靶基因。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶基因序列如SEQ ID NO.11所示或者为SEQ ID NO.11所示序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与CAR-T细胞检测相关的由SEQ ID NO.11衍生的基因片段。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用针对能够跨越DAP12-T2A的核苷酸序列的靶基因设计的上游引物、下游引物和探针进行TaqMan实时荧光定量PCR检测。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用SEQ ID NO.1所示的上游引物、SEQ IDNO.2所示的下游引物和SEQ ID NO.3所示的探针进行TaqMan实时荧光定量PCR检测。
5.一种检测以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括针对能够跨越DAP12-T2A的核苷酸序列的靶基因设计的上游引物、下游引物和探针。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SEQ ID NO.1所示的上游引物、SEQ ID NO.2所示的下游引物和SEQ ID NO.3所示的探针。
7.能够实现以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞检测的靶基因，其特征在于，所述靶基因的序列能够跨越DAP12-T2A的序列，优选的所述序列为SEQ ID NO.11所示序列或者为SEQ ID NO.11所示序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与CAR-T细胞检测相关的由SEQ ID NO.11衍生的基因片段。
8.用于以DAP12作为胞内信号的CAR-T细胞检测的引物，序列如SEQ ID NO.1/SEQ IDNO.2所示。
9.用于以DAP12作为胞内信号的CAR-T细胞检测的探针，序列如SEQ ID NO.3所示。
10.权利要求5所述的试剂盒、权利要求7所述的靶基因、权利要求8所述的引物或权利要求9所述的探针在以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞的检测中的应用。
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