[发明专利]用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法

权利要求书

1.一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：包括以下步骤：

（1）目的样品的采集：无菌采集动物粪便病料0.1 g-0.5 g，装入0.5-1 ml的PBS液中备用；

（2）分离纯化培养：

①取含有目的样品的PBS液0.5-0.8ml加到过滤器1中，所述过滤器1的滤膜厚度为25-35µm，将过滤器1放入到收集器1中，以11000 rpm-13000 rpm的转速离心0.5-2 min；

②将过滤器1中的滤液取出放入到过滤器2中，所述过滤器2的滤膜厚度为5µm，将过滤器2放入到收集器2中，以11000 rpm-13000 rpm的转速离心0.5-2 min；

③取过滤器2中的液体5-20 µl均匀涂于平板培养基中培养24-48 h,培养温度为40-45℃；

④从平板培养基中挑取单菌落接种至纯化培养基中进行纯化，纯化时间为24-48h，纯化温度为40-45℃；

⑤从纯化培养基中提取细菌基因组DNA，进行分子诊断，扩增出目的基因片段，即可判定为弯曲菌。

2.根据权利要求1所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述平板培养基的制备工艺为：首先准备原料：酪蛋白胰酶消化物22-24 g，淀粉0.8-1.2 g，氯化钠4-6 g，琼脂粉14-18 g，磷酸氢二钾 0.8-1.3 g，乳糖8-12 g，酵母浸膏4-6 g，蒸馏水800-1200 ml；将原料混匀溶解，115-140 ℃高压灭菌12-20 min，冷却至40-60℃，加入40-60 ml无菌脱纤维羊血，混匀制成平板。

3.根据权利要求3所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述平板培养基的准备工艺为：首先准备原料：酪蛋白胰酶消化物23 g，淀粉1 g，氯化钠5 g，琼脂粉16 g，磷酸氢二钾 1 g，乳糖10 g，酵母浸膏5 g，蒸馏水1000 ml；将原料混匀溶解，121℃高压灭菌15 min，冷却至50℃，加入50 ml无菌脱纤维羊血，混匀制成平板。

4.根据权利要求1所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述纯化培养基的制备工艺为：首先准备原料：酪蛋白胰酶消化物22-24 g，淀粉0.8-1.2 g，氯化钠4-6 g，琼脂粉14-18 g，磷酸氢二钾 0.8-1.3 g，乳糖8-12 g，酵母浸膏4-6 g，蒸馏水800-1200 ml；将原料混匀溶解，115-140 ℃高压灭菌12-18 mi，冷却至45-60℃，加入45-65ml无菌脱纤维羊血，多粘菌素B 80000-120000 IU，新生霉素1-3mg，放线菌酮15-25 mg，混匀制成平板。

5.根据权利要求4所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述纯化培养基的制备工艺为：首先准备原料：酪蛋白胰酶消化物23 g，淀粉1 g，氯化钠5 g，琼脂粉16 g，磷酸氢二钾 1 g，乳糖10 g，酵母浸膏5 g，蒸馏水1000 ml；将原料混匀溶解，121℃高压灭菌15 mi，冷却至50℃，加入50 ml无菌脱纤维羊血，多粘菌素B 100000 IU，新生霉素2mg，放线菌酮20 mg，混匀制成平板。

6.根据权利要求1所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述动物粪便为结肠粪便、空肠粪便或者胎儿粪便。

7.根据权利要求1所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：目的样品的采集：用肛拭子采集动物粪便病料0.1 g-0.5 g，装入0.5-1 ml的PBS液中备用。

8.根据权利要求1所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：所述过滤器1的滤膜厚度为30µm。

9.根据权利要求1-8任一项所述的一种用于弯曲菌的快速分离纯化培养方法，其特征是：①取含有目的样品的PBS液0.5 ml加到过滤器1中，过滤器1的滤膜厚度为30µm，将过滤器1放入收集器1中，以12000 rpm转速离心1 min；

②将过滤器1中的滤液取出放入到过滤器2中，过滤器2的滤膜厚度为5µm，将过滤器2放入收集器2中，12000 rpm离心1 min。