[发明专利]一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法

说明书

本发明公开了一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，属于植物组织培养领域，包括如下工艺：采集幼嫩的茎段，用75%的酒精消毒30 s 后用0.1%的升汞消毒10 min，接种在不定芽诱导培养基上；待不定芽长出后，切去叶片两端并切断叶脉接种到叶片愈伤组织诱导培养基；将由茎段诱导产生的和由叶片愈伤分化产生的不定芽接种到增殖培养基上；当单苗长至5‑6cm 后移植到生根培养基上；当单苗根长到到3‑4cm后炼苗。本发明的优点：能够诱导天使红软籽石榴试管苗快速增殖产生大量不定芽，诱导率高达92.22%，为工厂化育苗提供了一条有效的途径。

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体地说，涉及一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法。

背景技术

石榴（Punica granatum L.），属于千屈菜科（Lythraceae）石榴属(Punica L.)果树，具有较高的营养价值和保健功能，近年来石榴越来越受到消费市场的青睐，石榴产业在国内外发展迅速。软籽石榴的种皮较软，种仁退化，籽粒大，在鲜食消费方面具有较高的价值。目前我国石榴栽培中软籽品种所占比例相对较少，市场售价是普通品种的2-4倍，市场前景广阔。天使红软籽石榴是从美国引进的优良软籽石榴品种，果个中等，果皮红色，酸甜适口，出汁率高，株型矮小，优质高产。

由于天使红软籽石榴品种珍贵、资源较少，利用常规的育种方法无法满足当前生产与市场需求，无法实现植物组织培养繁殖速度快、保持原有品种的优良性状、可进行周年工厂化生产等优势。目前，还没有天使红软籽石榴的组培快繁研究报道。

发明内容

为克服上述技术问题，本发明提供一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，该方法简单、可操作性强，为快速、稳定的繁殖天使红软籽石榴提供了高效可行的途径，为工厂化生产优良苗木奠定了理论基础。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，包括以下步骤：

1）采集幼嫩的茎段为外植体，用75%的酒精消毒30 s后用0.1%的升汞消毒10 min，无菌水充分清洗；

2）将消毒后的茎段接种在配方为WPM +2 g/L PVP+ 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L6-BA的不定芽诱导培养基上。

3）待不定芽长出后，选用诱导过程中产生的叶片，切去叶片两端并切断叶脉接种到配方为WPM + 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的叶片愈伤组织诱导及分化诱导培养基。

4）将由茎段诱导产生的不定芽和由叶片愈伤分化产生的不定芽接种到配方为WPM+ 0.1 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的增殖培养基上。

5）剪取生长健壮、长5-6cm 的单苗进行生根培养，生根培养基为1/2 MS + 0.7mg/L IBA+ 0.2 g/L PVP。

6）当单苗根长达到3-4cm的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶炼苗5-20d左右，遮阴度宜为50%-70%，然后打开瓶口，再放置3-7d；当组培苗根长达到5-6cm且植株长势良好时进行移栽。移栽基质选择草炭和蛭石以2:1的比例混合，充分混合后用高温灭菌。移栽环境的温度在25-28℃，湿度在80％-85％，光照时间每天12-14 h。