[发明专利]一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）采集幼嫩的茎段为外植体，用75%的酒精消毒30 s后用0.1%的升汞消毒10 min，无菌水充分清洗；

2）将消毒后的茎段接种在配方为WPM +2 g/L PVP+ 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的不定芽诱导培养基上；

3）待不定芽长出后，选用诱导过程中产生的叶片，切去叶片两端并切断叶脉接种到配方为WPM + 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的叶片愈伤组织诱导及分化诱导培养基上；

4）将由茎段诱导产生的不定芽和由叶片愈伤分化产生的不定芽接种到配方为WPM +0.1 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的增殖培养基上；

5）剪取生长健壮、长5-6cm 的单苗进行生根培养，生根培养基为1/2 MS + 0.7 mg/LIBA+ 0.2 g/L PVP；

6）当单苗根长达到3-4cm的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶炼苗5-20d左右，遮阴度宜为50%-70%，然后打开瓶口，再放置3-7d；当组培苗根长达到5-6cm且植株长势良好时进行移栽。

2.如权利要求1所述的一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，其特征在于，所述的步骤2）、3）、4）中的WPM 基本培养基包含6.5 g/L琼脂和30 g/L蔗糖，以及包括以下成分：NH₄NO₃ 400mg/L、Ca(NO₃)2·4H₂O 556mg/L、CaCl₂·2H₂O 96mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、K₂SO₄ 990mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·H₂O 22.4mg/L、ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L、NaMoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.25mg/L、FeSO₄·7H₂O₂ 7.8mg/L、Na₂-EDTA37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、维生素B1 1.0mg/L、维生素B6 0.5mg/L。

3.如权利要求1所述的一种天使红软籽石榴组织培养快繁方法，其特征在于，所述的步骤5）中的MS 基本培养基包含6.5 g/L琼脂和30 g/L蔗糖，以及以下成分：NH₄NO₃ 1650mg/L、KNO₃ 1900mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、CaCl₂·2H₂O 440 mg/L、KI 0.83mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·4H2O 22.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、NaMoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂-EDTA37.25mg/L、肌醇 100mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L。