[发明专利]用于检测血清外泌体pIgR的试剂在制备诊断原发性胆汁性胆管炎并预测其疗效的试剂盒中的应用及应用

说明书

本发明属于医学检测领域，涉及一种血清外泌体PIGR，具体来说是血清外泌体pIgR作为原发性胆汁性胆管炎诊断标记物及预测疗效的用途。本发明采用的技术方案是：一种利用血清外泌体pIgR作为原发性胆汁性胆管炎诊断及疗效预测的标志物的试剂盒，其特征在于：该试剂盒中包括下述组分：pIgR标准品；pIgR抗原包被的聚苯乙烯ELISA微孔板；酶标二抗；样本稀释液；辅助试剂。试剂盒的应用方法技术方案，包括以下步骤：(1)制成样本稀释液；(2)用BSA‑PBS溶液稀释pIgR标准品为8个梯度；(3)在微孔板中加入标准品和样本稀释液；(4)每孔加入酶标二抗；(5)每孔加入显色液；(6)用酶标仪在450nm波长读取OD值，绘制标准曲线，换算出样本中pIgR浓度。通过采用上述方案实现新的试剂盒和应用。

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及一种血清外泌体PIGR，具体来说是血清外泌体pIgR作为原发性胆汁性胆管炎诊断标记物及预测疗效的用途。

背景技术

原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis ,PBC)，旧称原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis)，是一种累及肝内胆管系统的慢性进展性自身免疫性疾病，主要表现为肝内小胆管进行性破坏伴门脉炎症性改变，最终导致纤维化、肝硬化甚至肝癌。本病主要发生于中年以上女性，男性病例仅占10％。目前，血清中的抗线粒体抗体及其M2亚型是PBC最重要的辅助诊断指标，但该指标存在一定比例的漏诊和误诊，而且无法判断PBC的病情进展。而对于AMA及其M2亚型阴性的PBC患者，其诊断主要依赖于肝组织学检测，但这种损伤性检查许多患者不愿接受。熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)是目前唯一被批准用于长期治疗PBC的药物，其2年生化应答率可预测长期生存率及并发症发生率，但高达40%的PBC患者对UDCA治疗应答不佳；应答不佳的PBC患者只能选择肝脏移植，却往往受限于短缺的肝源和昂贵的治疗费用。因此，对PBC患者进行早期诊断、治疗及疗效判断，具有重要的社会意义。

近年来，液体活检相关的研究越来越受到关注，而外泌体作为其中之一，其相关的生物标志物研究为PBC的诊断、预后预测开拓了新思路，有望进一步提高PBC诊断、预后的精确性，完善诊疗策略。

外泌体是一类直径约40-150nm的双层脂质膜包被的细胞外囊泡，由细胞膜包裹一些细胞因子、生物活性物质及膜表面受体内陷，在细胞内包装完成后再释放至细胞外基质中，主要负责细胞间的物质运输和信息传递。外泌体广泛存在于血液、尿液、腹水等人体大多数体液中；含量也极为丰富，每毫升血浆中就含有10^8-13个；可携带多种生物活性物质，包括细胞特异蛋白、脂质体及核酸，并能作为信号分子向其他细胞传递信息；稳定性极高，在各种冷冻冷藏和解冻条件下都可保存长达数年。这些优点使外泌体具有成为新型生物标志物的潜能。

近年来的一些研究也证明了这点。已有研究表明通过检测尿液中外泌体RNA的PCA3、SPDEF及ERG指标，可以辅助判断被检者是否患有前列腺癌。另一项研究表明，通过血液/血浆中的外泌体RNA和循环肿瘤DNA，可以对肿瘤相关的170个基因、82000个突变类型进行检测，敏感度高达99.9%。而在外泌体蛋白研究方面，目前ExosomeDX研发的Shahky系统能够在包括血液、脑脊液、尿液、唾液、腹水等体液中检测某些疾病的特异性外泌体蛋白指标，其灵敏度高于传统的ELISA、WB技术。

聚免疫球蛋白受体pIgR是一类炎症调控子，目前已知的功能是把聚合免疫球蛋白从基底外侧转胞吞到上皮顶端，促进IgA和IgM的分泌，形成机体抵御炎症的第一道屏障。近年来，有文献报道pIgR作为肝癌的辅助诊断标志物具有较高的敏感性和特异性。此外，pIgR还参与乙型肝炎病毒感染、肝脏的慢性炎症、诱发内皮间充质转化、肝癌复发以及转移浸润。迄今为止，尚无文献报道pIgR对PBC的诊断和UDCA疗效预测价值，该指标亦尚未在临床上得到应用。

发明内容