[发明专利]一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明涉及一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒的荧光定量PCR试剂盒。所述试剂盒包含HBV、HCV和HIV‑1的检测引物和探针，所述引物和探针的序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.9所示。本发明提供的试剂盒采用多重荧光PCR方法，能够实现DNA病毒HBV以及RNA病毒HCV和HIV‑1的同时检测，且一种病毒核酸的扩增不会对其他两种产生影响，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测时间短、检测成本低、操作技术要求低和不易污染等优点，对于血液中心或血站进行献血者的HBV、HCV和HIV‑1三种病毒的同时检测具有重要的意义和较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属嗜肝病毒科(Hepadnaviridea)、正嗜肝DNA病毒属(Orthohepadnaviru-s)，为乙型肝炎的致病因子。HBV为有包膜的很小的DNA病毒，直径约42nm。HBV基因组DNA为部分双链的环状结构，长约3200bp。在中国流行的B和C基因型均为3215bp。据世界卫生组织报道，世界上有超过20亿人感染过乙肝病毒，其中约有3.5亿人患有慢性乙型肝炎(HBV)，乙型肝炎病毒为一种流行十分广泛的部分双链DNA病毒，是导致急慢性肝炎和肝细胞癌变的致病因子，严重危害了人类公共卫生安全。慢性HBV感染是引起慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭和原发性肝癌的主要原因，因此检测筛查是否感染HBV、感染后的治疗效果评价以及免疫水平监测具有重要意义。

丙型肝炎(hepatitis C virus，HCV)属于黄病毒科(flaviviridae)，其基因组为单股正链RNA病毒，由于基因型不同，从各地分离的HCV基因组长度也不一致，一般约为9400bp。HCV是一种隐匿性、传染性、持续性、进展性疾病，主要传播途径包括血液传播、性传播和母婴传播。丙型肝炎病毒感染后少数引起急性肝炎，其症状也较乙型肝炎轻。一般成人感染HCV后，约50％至80％发展成慢性丙型肝炎，其中约20％发展为肝硬化，肝硬化患者每年约有1％至4％发展为肝癌。丙型肝炎是一个重要的公共卫生问题，丙型肝炎病毒感染是引起慢性肝炎的主要原因之一。

获得性人类免疫缺陷综合征(Acquired immune deficiency syndrome，AIDS，艾滋病)是由于感染人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)造成的。HIV感染是严重危害人类健康的全球问题，目前尚无有效的疫苗可以预防HIV的感染。HIV病毒具有高度的基因变异性，根据血清学和基因序列的差异，HIV分为HIV-1型和HIV-2型。HIV-1广泛分布于世界各地，是造成全世界HIV流行的主要病毒。

输入不健康血液或血液制品是感染艾滋病和病毒型肝炎等传染病的重要原因之一。《中国输血技术操作规程》规定，献血者必须进行酶联免疫(ELISA)方法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的检测。而抗-HCV检测的窗口期为70天，就目前的检测方法不可避免地要出现漏检。利用PCR方法检测病毒核酸，可将窗口期缩短到13天。HBV、HCV和HIV-1及时地发现并且及早地诊断对病毒性肝炎和艾滋感染者的治疗非常重要，能够有效地降低患者的死亡率，并且提高其生存质量。利用RT-PCR方法进行献血者HBV、HCV和HIV-1的检测，可大大缩短窗口期，增加检测的灵敏度，减少漏检，使输血更趋安全。

虽然目前国内外对同步检测HBV、HCV和HIV-1的方法己有报道，但所需仪器设备先进，费用昂贵，需要训练有素的分子生物学技术人员方能完成，不适合用于大规模的献血人员的筛查。因此，亟需开发灵敏、特异、高效的HBV、HCV和HIV的检测方法，以提高检测效率，降低检测成本。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量PCR试剂盒。