[发明专利]一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量PCR试剂盒

权利要求书

1.一种用于同步检测HBV、HCV和HIV-1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含分别检测HBV、HCV和HIV-1的引物和探针，所述引物和探针的序列如SEQ ID NO.1~ SEQ ID NO.9所示，其中，检测HBV的引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示；检测HCV的引物序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示；检测HIV-1的引物序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示，探针序列如SEQ ID NO.9所示；

所述HBV的探针的5’端用荧光基团FAM标记，3’端用淬灭基团MGB标记；

所述HCV的探针的5’端用荧光基团ROX标记，3’端用淬灭基团MGB标记；

所述HIV-1的探针的5’端用荧光基团CY5标记，3’端用淬灭基团MGB标记。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTP、MgCl₂、DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、PCR反应液中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内参基因的引物和探针、阳性对照、阴性对照中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因为人肌动蛋白β-Actin基因。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因的引物和探针的序列如SEQ ID NO.10~SEQ ID NO.12所示。

6.根据权利要求1~5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述分别检测HBV、HCV和HIV-1的引物和探针中上游引物、下游引物和探针的工作浓度比例为2:2:1。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述分别检测HBV、HCV和HIV-1的引物和探针中上游引物的工作浓度为100~400 nM，下游引物的工作浓度为100~400 nM，探针的工作浓度为100~200 nM。

8.根据权利要求1~5、7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法如下：

（1）样品采集与处理；

（2）样品核酸的提取；

（3）配制PCR反应体系，并将样品核酸、阴性对照和阳性对照分别加入PCR管中；

（4）进行PCR反应，反应结束后分析结果。

9.一种用于同步检测HBV、HCV和HIV-1的引物和探针的混合物，其特征在于，所述引物和探针的序列如SEQ ID NO.1~ SEQ ID NO.9所示，其中，检测HBV的引物序列如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示；检测HCV的引物序列如SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示；检测HIV-1的引物序列如SEQ IDNO.7、SEQ ID NO.8所示，探针序列如SEQ ID NO.9所示；

所述HBV的探针的5’端用荧光基团FAM标记，3’端用淬灭基团MGB标记；

所述HCV的探针的5’端用荧光基团ROX标记，3’端用淬灭基团MGB标记；

所述HIV-1的探针的5’端用荧光基团CY5标记，3’端用淬灭基团MGB标记 。

10.权利要求9所述的引物和探针的混合物在制备HBV、HCV、HIV-1中的一种或多种的检测试剂中的应用。