[发明专利]一种新疆出血热病毒多表位真核表达载体pVAX-MEPX2的构建及应用在审
| 申请号： | 201811085515.0 | 申请日： | 2018-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN109266661A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 孙素荣;俞欢;阿来·沙力塔那;李轶杰;张富春 | 申请（专利权）人： | 新疆大学 |
| 主分类号： | C12N15/40 | 分类号： | C12N15/40;C12N15/85;A61K31/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 830046 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表位 新疆出血热病毒 真核表达载体 真核表达载体pVAX 蛋白质疫苗 单一抗原 拷贝基因 重组真核表达载体 免疫保护效果 细胞免疫水平 保守表位 开发应用 抗体水平 免疫动物 免疫效果 免疫效力 免疫原性 药物应用 重组质粒 构建 制备 联合 试验 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种在制备新疆出血热疫苗中应用的重组真核表达载体，其特征在于，该载体是由新疆出血热病毒多表位双拷贝基因片段MEPX2与真核表达载体pVAXⅠ组合获得的pVAX-MEPX2重组真核表达载体，MEPX2基因片段核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种如权利要求1所述的在制备新疆出血热疫苗中应用的重组真核表达载体的制备方法，其特征在于，重组真核表达载体的具体制备方法步骤如下：
（1）基于新疆出血热病毒YL04057株单拷贝基因序列MEPX以及经反复串联的双拷贝基因序列MEPX2的前后分别加入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点进行优化；
（2）将步骤（1）中优化后的基因片段进行碱基合成；
（3）将BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶与真核表达载体pVAXⅠ空载体进行酶切反应，并导入步骤（2）中获得的MEPX2基因片段构建重组真核表达载体pVAX-MEPX2；
（4）通过上述步骤和（3）分别将获得重组质粒转化至工程菌中并对该重组质粒提取并纯化，酶切鉴定后，进行测序鉴定；
（5）确认测序无误后，将质粒保藏备用。
3.权利要求1、2中所述的一种重组真核表达载体在制备新疆出血热疫苗中的应用。
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