[发明专利]一种兽用自体血清角膜中期保存液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种兽用自体血清角膜中期保存液及其制备方法，属于兽药试剂制备技术领域。本发明通过使用供体血清，提供了一种经济、保存效果好的配制方案，解决了目前尚无兽用中期角膜保存液、商品化人用角膜中期保存液价格昂贵的问题。将下列药品分别溶于双蒸水，制成每1000mL含MEM9.5g，HEPES 5.96g，葡聚糖20g，碳酸氢钠2.2g，地塞米松磷酸钠25mg，还原型谷胱甘肽0.92g，庆大霉素10mg，两性霉素b 250μg，透明质酸钠15 mg，供体血清300mL的溶液，过滤灭菌，4°C保存。本发明通过检测兔角膜内皮细胞活性、角膜透明度、厚度及组织结构，比较了自体血清保存液与无血清保存液的角膜保存效果，能够保存兔角膜7~14d，具有保护角膜内皮、抑制角膜水肿的良好效果。

技术领域

本发明涉及一种兽用自体血清角膜中期保存液及其制备方法，属于兽药试剂制备技术领域。

背景技术

随着中国宠物数量的迅速发展，宠物疾病迅速增多。角膜移植已成为治疗严重犬角膜疾病的常用手术。角膜保存液为移植术提供了供体角膜，并使角膜移植术由紧急手术转化为择期手术，为供体和供体角膜的检查提供时间。然而目前兽医临床角膜移植缺乏有效、经济和简便的角膜保存液。

维持角膜内皮的生存能力和完整性是角膜保存技术的重要目标。按照对角膜内皮细胞活性的影响，角膜保存可分为活性保存和非活性保存。活性保存又可根据保存时间分为短期保存、中期保存和长期保存。短期保存主要指湿房保存，是将全眼取出，经灭菌处理，封闭放置在4℃湿房中。该方法保存时间在48小时内，难以满足术前筛查，移植失败率偏高。长期保存包括器官培养和深低温冷冻保存，可维持角膜活性数周至数年，但所需设备复杂，价格昂贵。

中期角膜保存是将供体角膜片无菌储存于4℃保存液中，利用低温抑制角膜代谢，降低组织能量需求，使角膜内皮活性保持4～14天。目前常用中期保存液有Optisol、Eusol-C、Optisol-GS和Dexsol等，其中Optisol是美国眼库最常用的角膜活性保存液，具有维持角膜厚度、保持内皮细胞形态与结构稳定的效果。这些进口商品化中期角膜保存液一方面价格偏高，另一方面是针对人角膜移植研制，在我国宠物诊疗行业难以推广。因此找到有效、经济和简便的兽用角膜保存技术具有重要临床意义。

中期角膜保存液的常见成分包括HEPES缓冲液、硫酸软骨素、葡聚糖、透明质酸钠、皮质类固醇、抗微生物药、抗氧化剂、各种生长因子和受体血清。血清与房水成分相似，可用于角膜保存。在人角膜保存液的研制中，已有人使用受体血清保存角膜。与受体血清相比，供体血清源自供体本身，是更理想的角膜保存液成分，也为我们配制兽用角膜中期保存也提供了思路。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明目的在于填补当前尚无兽用角膜中期保存液的空缺，提供了一种含有自体血清的兽用角膜中期保存液并对其血清含量进行合理优化。该保存液能有效抑制角膜水肿、保持角膜透明度，维持角膜内皮细胞活性和形态结构的完整性，避免因长时间保存而出现的内皮细胞坏死和融合现象。

为了实现上述发明目的，本发明的兽用角膜中期保存液成分为：MEM9.5g/L、HEPES5.96g/L、葡聚糖20g/L、碳酸氢钠2.2g/L、地塞米松磷酸钠25mg/L、还原型谷胱甘肽0.92g/L、庆大霉素10mg/L、两性霉素B 250μg/L、透明质酸钠15mg/L、供体血清30％，百分比为体积百分比，即，每1000mL角膜中期保存液组成为：MEM培养基9.5g、HEPES缓冲液5.96g、葡聚糖20g、碳酸氢钠2.2g、地塞米松磷酸钠25mg、还原型谷胱甘肽0.92g、庆大霉素10mg、两性霉素B 250μg、透明质酸钠15mg、供体血清300mL，余量为双蒸水。

一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，制备步骤包括：

1)配制基础液；

2)无菌条件下添加透明质酸、庆大霉素、两性霉素B；

3)添加供体血清。