[发明专利]一种兽用自体血清角膜中期保存液及其制备方法

权利要求书

1.一种兽用自体血清角膜中期保存液，其特征在于，每1000mL角膜中期保存液组成为：MEM培养基9.5g、HEPES缓冲液5.96g、葡聚糖20g、碳酸氢钠2.2g、地塞米松磷酸钠25mg、还原型谷胱甘肽0.92g、庆大霉素10mg、两性霉素B 250μg、透明质酸钠15 mg、供体血清300mL，余量为双蒸水。

2.根据权利要求1所述的一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，制备步骤包括：

1）配制基础液；

2）无菌条件下添加透明质酸、庆大霉素、两性霉素B；

3）添加供体血清。

3.根据权利要求2一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，基础液配制步骤包括：

a）按权利要求1所述配方，将MEM培养基干粉9.5g、葡聚糖20g、碳酸氢钠2.2g、地塞米松磷酸钠25mg、还原型谷胱甘肽0.92g溶解于双蒸水中，用约5.96gHEPES缓冲液调节pH至7.4，定容至700mL；

b）在超净工作台内使用0.22μm滤器，将步骤a）得到的溶液过滤除菌，得到基础液，备用。

4.根据权利要求2所述的一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，步骤2）中，在无菌条件下，将透明质酸钠15mg、庆大霉素10mg、两性霉素B250μg加入基础液中。

5.根据权利要求2或4所述的一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，步骤2）中，将添加了透明质酸、庆大霉素、两性霉素B的基础液分装于20mL保存瓶中，每瓶14mL。

6.根据权利要求5所述的一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，将供体血清加入所述的保存瓶至保存瓶内液体体积为20mL，封口，4°C保存。

7.根据权利要求2或6所述的一种兽用自体血清角膜中期保存液的制备方法，其特征在于，供体血清制备步骤包括：

（1）采血15~20mL；

（2）于37°C静置2h，待血清完全析出；

（3）在4°C条件下1400 g离心15分钟，吸取上清液；

（4）无菌条件下，使用0.22μm孔径的一次性滤器，将血清过滤除菌。