[发明专利]金花茶的组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了金花茶的组织培养快速繁殖方法，包括：将金花茶丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；其中，生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，上层培养基为：3/4MS+2.5‑3.0mg/L NAA+1.0‑1.5mg/L LFS+1.4‑1.8mg/L 4‑CPA+1‑5g/L羊角碳化粉；下层培养基为：1/2MS+1.0‑1.5mg/L NAA+0.5‑1.0mg/L 2,4‑D+0.5‑0.8mg/L MET+1.0‑1.5mg/L氯化胆碱+15‑20g/L羊角碳化粉。本发明的方法可有效提高金花茶的增殖系数，为金花茶的保护提供了一种新的路径。

技术领域

本发明涉及组织培养领域。更具体地说，本发明涉及一种金花茶的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

金花茶属于山茶科、山茶属，与银杉、桫椤、珙桐等珍贵“植物活化石”齐名，属《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅱ中的植物种，国外称之为神奇的东方魔茶，被誉为“植物界大熊猫”、“茶族皇后”。金花茶可通过传统的播种、扦插和嫁接方式繁殖，但上述方法均无法快速有效的扩大金花茶的种群数量。如何快速繁殖金花茶，已成为保护金花茶亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种金花茶的组织培养快速繁殖方法，其以金花茶幼嫩的茎尖，采用组织培养方式快速获得金花茶幼苗，该方法可有效提高金花茶的增殖系数，达4.8-5.0倍，畸形苗率低至0.6％，幼苗成活率高达94.1％，幼苗平均株高92mm，有效解决了传统繁殖方式无法快速有效的扩大金花茶的种群数量的问题，为金花茶的保护提供了一种新的路径。

为了实现根据本发明的目的和其它优点，提供了一种金花茶的组织培养快速繁殖方法，包括：

步骤一、剪取金花茶幼嫩的茎尖，经处理后，得外植体；

步骤二、将所述外植体经丛生芽诱导培养，得丛生芽；

步骤三，将所述丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；

其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.5-3.0mg/L NAA+1.0-1.5mg/L LFS+1.4-1.8mg/L 4-CPA+1-5g/L羊角碳化粉；所述下层培养基为：1/2MS+1.0-1.5mg/L NAA+0.5-1.0mg/L 2,4-D+0.5-0.8mg/L MET+1.0-1.5mg/L氯化胆碱+15-20g/L羊角碳化粉；培养条件为：先于22-26℃，黑暗条件下培养3d，再于22-26℃，光照强度1800-2200lux，光照时间8h/d的条件下培养20d，最后于20-30℃，相对湿度为60-80％，遮光度为30-40％的自然光照条件下培养20d。

优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述上层培养基的厚度为2-4cm，所述下层培养基的厚度为3-5cm。

优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述羊角碳化粉的制备方法为：将羊角用水洗净、沥干，将其置于碳化炉中，先在60-80℃下保温4-6h，然后以5℃/小时的升温速率升温至120-140℃保温2-3h，再以30℃/小时的升温速率升温至620-650℃，保温0.5-1.5h后，先以40℃/小时的降温速率降温至180-200℃，再以20℃/小时的降温速率降温至100℃以下，待冷却后取出，置于球磨机中球磨至平均粒径为7-10μm，即得。

优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，步骤一中，所述处理具体为：将所述茎尖用质量分数为2％的洗洁精水溶液浸泡30min，取出，用流水冲洗10-15min，然后将其置于装有预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液的软包装袋中，浸没、封口，将所述软包装袋置于超高压容器中，于80-90MPa下处理1-6s，将所述茎尖从所述软包装袋中取出，用无菌水冲洗6-8次并用消毒滤纸吸取其表面的水分。