[发明专利]一种构建微生物共培养体系高产虎奶菇胞外多糖的方法

说明书

本发明公开了一种构建微生物共培养体系高产虎奶菇胞外多糖的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过采用虎奶菇菌丝体与乳酸菌共培养，并优化了共培养时乳酸菌的接种量及共培养时间，提高了多糖产量，并改进其溶解性。本发明所用菌种均是食用菌株，安全可靠，所用培养基原料廉价易得，无污染，易于实现。本发明方法工序简便、操作性强，可实现规模化、工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种构建微生物共培养体系高产虎奶菇胞外多糖的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

虎奶菇(Pleurotus tuber-regium)，学名菌核侧耳，又名虎奶菌、核耳菇、茯苓侧耳、南洋茯苓等，属于担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，是一类主要分布于热带及亚热带地区的珍稀食药用真菌。虎奶菇不仅具有极高的营养价值，还富含多种生物活性成分，多糖作为其中含量最高的成分，近年来备受关注。研究表明，虎奶菇多糖能显著提高机体免疫功能，在医学、保健品、食品、药物载体等领域有良好的应用前景。虎奶菇菌丝体经液态发酵会产生胞外多糖，该多糖虽基本结构与菌核及子实体多糖有差异，但均具有高度支化的形态，因此具有巨大的潜在研究和应用价值。目前生产虎奶菇菌丝体胞外多糖的方法大多是仅通过虎奶菇菌丝体液态发酵，但是得到的胞外多糖存在产率较低、溶解性较差等缺陷。这些问题严重限制了其进一步的基础及应用研究。

乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称，广泛存在于人体的肠道中，其对人体肠道微生态的调节作用和人体健康的促进作用日益受到关注，也成为近年来的研究热点。不同的微生物之间具有复杂的相互作用，常被应用于食品及农业生产中，相应的共培养体系也常被构建以用于已知生物活性物质的增产或未知代谢产物的增加。但目前还未发现利用乳酸菌与大型真菌混合发酵提高多糖产量的应用实例。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种高产虎奶菇胞外多糖的方法，是利用乳酸菌和虎奶菇菌丝体两种微生物构建共培养体系。具体包括以下步骤：

(1)将虎奶菇菌丝体加入到种子培养液中预培养；将乳酸菌加入到液体培养基中进行预培养；

(2)将虎奶菇菌丝体预培养后得到的培养液接入到发酵培养基中液态发酵7d；

(3)在步骤(2)的发酵进行至第3-6d时，将乳酸菌预培养后得到的培养液接种到虎奶菇菌丝体发酵液中，进行共培养；

(4)发酵结束后离心、过滤，所得滤液即为发酵液，向发酵液中加入乙醇，搅拌，静置后收集沉淀，溶解沉淀，冷冻干燥，获得虎奶菇胞外多糖。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述的虎奶菇菌丝体的预培养是将虎奶菇菌丝加入到种子培养液中，在160-200rpm，26-32℃条件下预培养2-4d。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述的乳酸菌的预培养是将乳酸菌加入到MRS培养基中，在100-120rpm，30-40℃条件下预培养18-36h。

在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的液态发酵是指虎奶菇菌丝体培养液的接种量为5-10％，接入发酵培养基，在150-200rpm，25-32℃下发酵7d。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中虎奶菇菌丝体的种子培养液和步骤(2)中发酵培养基配方为：葡萄糖20-40g/L，酵母浸粉3-5g/L，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)0.5-1.5g/L，七水硫酸镁(MgSO₄·7H2O)0.4-1.0g/L。

在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的共培养是指在发酵至第3-6d时，将乳酸菌接种到虎奶菇菌丝体发酵液中，接种量为2.5-10％，在150-200rpm，26-35℃条件下共培养1-4d。

在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中离心指的是3000-5000g离心5-10min。